[发明专利]用于γδT的细胞扩增培养基、组合产品及其培养方法

说明书

本发明涉及用于γδT的细胞扩增培养基、组合产品及其培养方法。所述γδT细胞扩增培养基包括基础培养基以及附加组分，所述附加组分包括：5％～15％(v/v)FBS、IL2 200IU/mL～800IU/mL、IL21 1ng/mL～20ng/mL以及辅酶Q10 5μmol/L～20μmol/L。与传统方法相比，本发明能显著提高γδT细胞的扩增效率和细胞纯度，培养得到大量高纯度的γδT细胞，还能够有效维持γδT细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。γδT细胞经过基因工程手段修饰表达嵌合性抗原受体后可用于于异体回输，不产生移植物抗宿主病，因而具有更为广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及用于γδT的细胞扩增培养基、组合产品及其培养方法。

背景技术

根据TCR受体的不同，可将T细胞分为αβT细胞和γδT细胞。其中，αβT细胞占T细胞总数的95％以上，γδT细胞则至占T细胞总数的1-5％，且主要分布于黏膜相关淋巴组织中。γδT细胞是一种既能杀伤癌细胞，肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞。γδT细胞虽然所占比例低，但对来自39个恶性肿瘤的约18000个人类肿瘤表达特征的荟萃分析表明，肿瘤内γδT细胞的表达是对生存率最有利的预后指标之一。另外，各种研究表明，γδT细胞能识别肿瘤细胞并对其有杀伤作用。

多种常见的抗原被用来刺激γδT细胞的扩增，例如异戊烯基焦磷酸酯(IPP)、(E)4羟基3甲基但2烯基焦磷酸酯(HMBPP)、唑来膦酸盐(Zometa)和溴水蛋白焦磷酸酯(BrHPP)，而唑来膦酸是被广泛使用刺激γδT细胞扩增。传统方法是在PBMC的培养基加入唑来膦酸和IL2，这种方法能得到纯度较高的γδT，但其缺点是不能得到大量的γδT细胞，导致难以运用在临床治疗上。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种γδT细胞扩增培养基，包括基础培养基以及附加组分，所述附加组分包括：

5％～15％(v/v)FBS、IL2 200IU/mL～800IU/mL、IL21 1ng/mL～20ng/mL以及辅酶Q10 5μmol/L～20μmol/L。

可选的，如上所述的γδT细胞扩增培养基，所述附加组分包括：

7％～13％(v/v)FBS、IL2 400IU/mL～600IU/mL、IL21 7ng/mL～13ng/mL以及辅酶Q10 7μmol/L～13μmol/L。

可选的，如上所述的γδT细胞扩增培养基，所述附加组分还包括维生素C。

可选的，如上所述的γδT细胞扩增培养基，所述维生素C浓度为5μmol/L～20μmol/L。

可选的，如上所述的γδT细胞扩增培养基，所述基础培养基为Optivitro培养基。

本发明的第二目的在于提供一种组合产品，包括如上所述的γδT细胞扩增培养基以及γδT细胞激活培养基；

所述γδT细胞激活培养基包括5％～15％(v/v)FBS、IL2 200IU/mL～800IU/mL、IL21 1ng/mL～20ng/mL以及双膦酸盐1μM～10μM。

可选的，如上所述的组合产品，所述双膦酸盐包括唑来膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、利塞膦酸、米罗磷酸中的一种或多种。

本发明的第三目的在于提供一种γδT细胞培养方法，其包括：

b)将γδT细胞用如上所述的γδT细胞扩增培养基进行培养。

可选的，如上所述的培养方法，在b)之前还包括步骤a)：用如上所述γδT细胞激活培养基对γδT细胞进行预培养。