[发明专利]pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系的构建方法，其特征在于，

仔猪小肠样品分离得到基因组DNA，并利用PCR技术扩增pBD1启动子片段，序列如SEQID NO.1所示，将pBD1启动子片段克隆到pGL4.21荧光报告载体中得到pBD1荧光报告质粒，进行酶切线性化后转染猪肠上皮细胞，从而筛选获得阳性细胞系。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，采用KpnI-Xhol酶对pBD1荧光报告质粒进行酶切线性化。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，酶切线性化后的pBD1荧光报告质粒转染猪肠上皮细胞IPEC-J2，pBD1基因荧光报告线性化载体分别与转染试剂、细胞培养基以2.5μg：1μL：1mL的比例混合，处理肠上皮细胞IPEC-J2共24小时，之后利用含3μg/mL嘌呤霉素的培养基筛选7天后存活的阳性细胞。

4.一种采用如权利要求1所述的pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系的应用，其特征在于，

以未转染质粒的普通肠上皮细胞IPEC-J2作为对照，分别用不同类型营养物质孵育pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系，利用荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶表达，荧光分光光度计测定荧光值。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的营养物质包括脂肪酸、氨基酸、维生素中的一种或者多种。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的脂肪酸包括丙酸、丁酸、正戊酸、正辛酸、乳酸；

所述的氨基酸包括异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸；

所述的维生素包括维生素A酸、维生素B2、维生素B6、维生素C、维生素D3、维生素E、维生素H、维生素P。