[发明专利]一种含PRP的生物墨水的制备方法及应用

说明书

本发明提供了本发明提供了一种含PRP的生物墨水的制备方法，该制备方法包括以下步骤：制备液态水凝胶，所述液态水凝胶包括以下质量百分比的各组分：1％‑30％的明胶，1％‑10％的海藻酸钠；将体积比为9‑36:1的液态水凝胶和PRP充分混匀，所述PRP的质量标准如下：以血小板浓度为准：单采血小板法≥1000×10⁹/L，二次离心法≥1×10⁹/L，即得含PRP的生物墨水；本发明提供的组织类器官的制备方法具有以下优点：(1)在不改变生物墨水的原有理化性能的同时，加入了生物活性成分；(2)在创面治疗中应用的安全性和有效性已得到广泛认可，具有优越的临床应用潜力。

技术领域

本发明涉及生物3D打印领域，特别涉及一种含PRP的生物墨水的 制备方法及应用。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，对维持人体内环境稳态和正常生理功能 具有十分重要的作用，较大皮肤缺损和病理性创面(如糖尿病创面) 通过常规临床消毒和换药，难以达到皮肤功能性无瘢痕愈合。虽然目 前已有多种组织工程皮肤可以用于创面治疗，但是这些产品缺乏个性 化功能，不能满足临床中特殊创面的需求。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了一种含PRP的生物墨水的 制备方法，该生物墨水经3D打印和交联固化后，可形成特定的三维结 构的水凝胶。

本发明提供的制备方法包括以下步骤：

制备液态水凝胶，所述液态水凝胶包括以下质量百分比的各组分： 1％-30％的明胶，1％-10％的海藻酸钠；

将体积比为9-36:1的液态水凝胶和PRP充分混匀，所述PRP的质 量标准如下：以血小板浓度为准：单采血小板法≥1000×10⁹/L，二次 离心法≥1×10⁹个血小板/mL，即得含PRP的生物墨水。

其中，PRP为富血小板血浆，富血小板血浆(PRP)是通过离心的 方法从血中提取出来的血小板浓缩物，PRP含有高浓度的纤维蛋白，可 以封闭创面和止血，更含有高浓度的血小板，经活化后可以释放出多 种生长因子，促进创面修复和一定程度的再生，PRP还含有大量的白细 胞，在机体验证反应和感染控制方面起重要作用，另外，PRP还含有多 种抑菌蛋白原，这些蛋白可以抑制细菌和真菌生长；本申请在液态水 凝胶中加入的PRP可以为临床患者自体来源的PRP，也可以是低免疫原 性的脐血PRP，本发明将PRP做为生物活性物质，加入生物墨水中，能 够增加生物墨水的功能型和个性化，从而更能满足临床创面治疗的需求；申请人研发过程中发现，PRP在生物墨水中的加入量会影响打印组 织块的性能，如加入的量超过临界值时，会导致生物墨水变烯，难以 成型，无法进行3D打印，即现有技术中的生物墨水在保证其各项性能 的前提下无法加入更多的PRP，而本发明的生物墨水中PRP的量较大 (每5ml生物墨水中可以加入0.125ml-0.5ml的PRP，PRP中的血小板 数量≥1×10⁹个血小板/mL，即每ml生物墨水中含有1×10⁷个血小板 /mL-1×10⁸个血小板/mL)，PRP的添加量显著高于现有技术，更适合 创面治疗的临床需求；且在提高PRP含量的同时并未影响生物墨水的 打印过程和交联效果，本发明中生物墨水的混匀、打印、交联均可以 在床边进行，无需进行多种试剂的反复混合操作，操作简单方便；而 且操作流程中无需光交联，用到的试剂均无细胞毒性，众所周知，部 分光交联剂被证实有致癌作用、皮肤接触毒性和生殖毒性，总之，本 发明具备临床应用的可行性和安全性。

进一步地，液态水凝胶的制备方法为：取明胶和海藻酸钠加入PBS 缓冲溶液中密封，在水浴条件下搅拌均匀，即得液态水凝胶。

进一步地，将液态水凝胶、PBS缓冲液和PRP充分混匀具体是在无 菌环境中，利用无菌注射器和三通装置将液态水凝胶、PBS缓冲液和 PRP混匀。

本发明还提供了一种含PRP的生物墨水，由以上任意一种制备方 法制备而成。