[发明专利]基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法

权利要求书

1.基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，所述检测方法通过不同荧光标记核酸探针对多种待测靶标进行多轮次重复成像检测，并根据靶标在不同轮次成像中荧光信号颜色种类及变化顺序来区分识别各个靶标种类，具体包括如下步骤：将样本中的每种待测靶标通过直接或间接方式结合一种或多种序列不同的寡核苷酸片段，每种寡核苷酸片段与一种或多种序列互补的荧光标记核酸探针通过碱基互补原理进行杂交后，用荧光成像设备成像，使待测靶标呈现对应的荧光信号，成像结束后，使用外加作用力或缓冲液去除所有荧光标记核酸探针，然后再次加入荧光标记核酸探针进行杂交成像，如此进行多轮的荧光标记核酸探针杂交成像，多轮杂交成像结束后，通过荧光信号出现的种类、顺序和位置来对样本中的不同靶标进行定性和定位检测。

2.根据权利要求1所述的基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，样本中的相同靶标在每一轮荧光标记核酸探针杂交成像中所显示的荧光颜色均相同，不同靶标在每轮荧光标记核酸探针杂交成像中所显示的荧光颜色相同或不同，但多轮荧光标记核酸探针杂交成像后，每种靶标都具有唯一的从第一轮到最后一轮荧光杂交成像的荧光信号颜色出现顺序，这一顺序为每种靶标的荧光颜色编码，根据相同荧光颜色编码出现的位置可确定对应靶标在样品中的分布位置。

3.根据权利要求1所述的基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，所述直接方式为通过核酸或核酸适配体使寡核苷酸片段直接与待测靶标结合，所述间接方式为通过寡核苷酸片段标记的抗体或抗原或其它分子与靶标结合。

4.根据权利要求1所述的基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，所述的样本为细胞或组织；所述靶标为蛋白质、多肽、蛋白多糖或核酸中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，所述荧光标记核酸探针包括至少一种荧光基团标记的寡核苷酸或至少一种单独合成或工程化的包含荧光发射部分及寡核苷酸标签识别结合部分的纳米材料。

6.根据权利要求1所述的基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，所述用于去除样品中的荧光标记核酸探针的外加作用为电场作用力，所述缓冲液为含有丙三醇、低盐的弱化氢键作用力的化合物成分的缓冲液。

7.根据权利要求5所述的基于颜色编码与可编程性荧光探针的多重靶标原位检测方法，其特征在于，所述纳米材料是至少一种纳米尺度的核酸、金属颗粒或量子点性质的材料。