[发明专利]5-氨基乙酰丙酸生产菌及其构建方法在审
| 申请号： | 202111010095.1 | 申请日： | 2021-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN113930439A | 公开（公告）日： | 2022-01-14 |
| 发明（设计）人： | 岳明瑞;谢沛;曹华杰;郭永胜;滕义卫 | 申请（专利权）人： | 新泰市佳禾生物科技有限公司;汕头市佳禾生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N15/66;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/31;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/125 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 薛鹏喜 |
| 地址： | 271200 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 氨基 乙酰 丙酸 生产 及其 构建 方法 | ||
1.一种5-氨基乙酰丙酸生产菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用Red同源重组技术将枯草芽孢杆菌中的pxpR、PoxB、ptsG、sucC、sucD和pta基因敲除，获得枯草芽孢杆菌工程菌；
(2)将质粒pHT43-J用AatⅡ和SmaⅠ双酶切处理，将hemO基因整合到双酶切处理后的质粒pHT43-J上，得到重组质粒pHT43-J-hemO，再用XbaⅠ和BamHⅠ对重组质粒pHT43-J-hemO进行酶切处理，将rhtA基因整合到酶切处理后的重组质粒pHT43-J-hemO上，获得第一重组表达载体；
将质粒pHT01用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切，再将hemF基因整合到双酶切处理后的质粒pHT01上，获得第二重组表达载体；
(3)将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入到枯草芽孢杆菌工程菌中，构建得到5-氨基乙酰丙酸生产菌。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，质粒pHT43-J的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述hemO基因经密码子优化处理，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述rhtA基因经密码子优化处理，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述hemF基因经密码子优化处理，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
5.由权利要求1-4任一项所述的构建方法构建的5-氨基乙酰丙酸生产菌。
6.权利要求5所述的5-氨基乙酰丙酸生产菌在发酵生产5-氨基乙酰丙酸中的应用。
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