[发明专利]一种抗原修复液及采用其制备的细胞爬片、以及细胞爬片的制备方法和应用有效
申请号: | 202111021983.3 | 申请日: | 2021-09-01 |
公开(公告)号: | CN113740522B | 公开(公告)日: | 2023-05-12 |
发明(设计)人: | 闫亚平;郝文斌;封雪;李科 | 申请(专利权)人: | 陕西脉元生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/53 | 分类号: | G01N33/53 |
代理公司: | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人: | 范巍 |
地址: | 710000 陕西省*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 抗原 修复 采用 制备 细胞 以及 方法 应用 | ||
1.一种采用抗原修复液制备细胞爬片的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将生长好细胞的爬片使用甲醛溶液、多聚甲醛溶液或戊二醛溶液进行固定,固定后进行洗涤;
2)将经过步骤1)处理的爬片采用抗原修复液进行终止处理;
3)将经过步骤2)处理的细胞爬片使用磷酸盐缓冲液进行洗涤;
4)将经过步骤3)洗涤后的爬片干燥后保存,即获得细胞爬片;
其中,所述的抗原修复液是浓度为1~1000mM的铵盐缓冲液,所述铵盐缓冲液能够与醛基反应;所述铵盐为(NH4)2SO4;在所述的铵盐缓冲液中加入十二烷基磺酸钠,且十二烷基磺酸钠占该抗原修复液质量的0.025%~0.25%;
使用的甲醛、多聚甲醛或戊二醛浓度为大于0.5%时,修复液的使用能够恢复阳性信号,延长保质期;
使用的甲醛、多聚甲醛或戊二醛浓度为小于等于0.5%的浓度时,修复液的使用能够延长保质期;
所述生长好细胞的爬片,其制备方法如下:
向已铺好细胞的爬片通过瞬时转染转入重组载体,待细胞生长至24~72h即得;或者,将通过稳定转染获得的稳定细胞系复苏,铺至爬片上,待细胞密度生长至≥80%即得。
2.根据权利要求1所述的采用抗原修复液制备细胞爬片的方法,其特征在于,步骤2)中,终止处理时间为1~10min。
3.根据权利要求1所述的采用抗原修复液制备细胞爬片的方法,其特征在于,步骤4)中,干燥的方法包括烘箱干燥、微波炉干燥、金属浴干燥、热风吹干燥,干燥时间为细胞爬片彻底干燥即可,将干燥后的细胞爬片于≤4℃下密封保存。
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