[发明专利]一种抗原修复液及采用其制备的细胞爬片、以及细胞爬片的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗原修复液及采用其制备的细胞爬片、以及细胞爬片的制备方法和应用，属于生物技术领域。该抗原修复液是浓度为1～1000mM的铵盐缓冲液，所述铵盐缓冲液能够与醛基反应。本发明首次将铵盐缓冲液用于固定后细胞的抗原修复上，有效的恢复或暴露被屏蔽或封闭的抗原(或抗原表位)，因此避免了检测当中假阴性结果的出现，增加了检测的正确率，同时有助于寻找的新的自身抗体。本发明还公开了采用上述抗原修复液制备细胞爬片的方法，具有操作时间短，步骤简单、细胞不掉片、实验结果一致性好等特点，制备得到的细胞爬片保质期长，抗原的信号在较长的一段时间维持不变。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗原修复液及采用其制备的细胞爬片、以及细胞爬片的制备方法和应用。

背景技术

在生物科学领域中，利用免疫细胞化学方法检测细胞和组织中的抗原，为抗原的定位及定性提供了重要信息，因此广泛被用于诊断与鉴别诊断中。由于组织或细胞爬片在制作过程中，使用化学试剂去进行固定，固定后的部分抗原在进行后续染色时可能不会被检测到，因此产生了抗原“屏蔽或封闭”的概念，在此情况下，抗原(或特定的表位)被隐藏起来，从而导致识别该抗原(或特定的表位)的抗体无法与其结合。为了解决上述问题，更好地暴露出抗原，所采取的方法就是进行抗原修复。

目前主要的抗原修复方法有热修复和酶法修复，这两种方法在以组织为载体的免疫组化上应用较多，而针对于以细胞为载体的免疫荧光法的修复，研究和应用的比较少。究其原因可能是：(1)热修复在高温下易导致细胞爬片掉片且耗时长，操作繁琐；(2)酶法修复易受酶的种类、作用时长、作用温度等因素影响，从而导致结果一致性较差；(3)即便是使用了热修复法或酶法进行修复，且难以达到好的修复效果。1992年，Soltys B J等人将SDS应用至固定后细胞的抗原修复上，其原理是基于十二烷基苯磺酸钠(SDS)的变性作用(Interrelationships of endoplasmic reticulum,mitochondria,intermediatefilaments,and microtubulesndash；a quadruple fluorescence labelingstudy.Biochem Cell Biol,70:1174-1186.)。J.M.Robinson在其文章中指出，虽然SDS可以修复某些抗原表位，但并非所有的抗原表位都能被修复(J.M.Robinson,D.D.Vandré.Department Antigen retrieval in cells and tissues:enhancement with sodiumdodecyl sulfate.Histochem Cell Biol 2001,116:119–130)。使用SDS进行抗原修复，如果SDS不能彻底的清洗，会导致孵育的抗体变性，进而影响实验结果。

当前的检测技术主要存在的问题如下：

(1)以细胞为底物的免疫荧光法，因固定剂的使用导致抗原(或特定的表位)被封闭，严重降低了检测的正确率和灵敏度；

(2)以细胞为底物的免疫荧光法，因固定剂的使用导致抗原(或特定的表位)被封闭，限制了该法在寻找新的自身抗体上的应用；

(3)现有的修复抗原的方法，操作步骤繁琐，修复条件及修复结果受多种因素的影响，不利于得到稳定且效果好的实验结果。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种抗原修复液及采用其制备的细胞爬片、以及细胞爬片的制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种抗原修复液，该抗原修复液是浓度为1～1000mM的铵盐缓冲液，所述铵盐缓冲液能够与醛基反应。

优选地，所述的铵类抗原修复液中还加入十二烷基磺酸钠，且十二烷基磺酸钠占该抗原修复液质量的0.025％～0.25％。