[发明专利]一种热稳定性提高的甲酸脱氢酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种热稳定性提高的甲酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述甲酸脱氢酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的甲酸脱氢酶的第21位的赖氨酸突变为脯氨酸，并将22位的赖氨酸突变为精氨酸获得。

2.一种权利要求1所述的甲酸脱氢酶突变体的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述的编码基因的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。

4.一种携带权利要求2或3所述编码基因的重组质粒。

5.根据权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒是以pET系列载体为表达载体。

6.一种表达权利要求1所述甲酸脱氢酶突变体的基因工程菌。

7.根据权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌是以大肠杆菌为宿主。

8.一种权利要求1所述的甲酸脱氢酶突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）根据突变位点，设计定点突变引物，以携带甲酸脱氢酶亲本编码基因的重组载体为模板进行定点突变，构建含编码突变体基因的表达载体；

（2）将含编码突变体基因的表达载体转化进表达宿主中；

（3）挑选阳性克隆进行发酵培养，离心收集细胞，将细胞进行超声破碎后再离心，取上清液，得到所述甲酸脱氢酶突变体的粗酶液。

9.权利要求1所述的甲酸脱氢酶突变体在辅酶再生中的应用，其特征在于，所述应用具体是以甲酸盐为底物，还原NAD⁺获得NADH。