[发明专利]一种唾液DNA提取的方法在审
| 申请号： | 202111024751.3 | 申请日： | 2021-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN113736772A | 公开（公告）日： | 2021-12-03 |
| 发明（设计）人： | 张伟 | 申请（专利权）人： | 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 100176 北京市大兴*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 唾液 dna 提取 方法 | ||
1.一种唾液DNA提取的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)：预处理：取唾液于离心管中，加入裂解液和蛋白酶K溶液混匀，将离心管放入56℃水浴锅中孵育15min；
(2)核酸吸附：向离心管中加入磁珠悬浮液与DNA结合液，涡旋震荡后室温静止5min；
(3)洗涤：将步骤(2)获得的混合物置于磁力架上静置2min，待磁珠完全吸附于离心管侧壁后，弃溶液，用洗涤液1和洗涤液2洗涤，最后用洗脱液溶出DNA，得到纯化的DNA。
2.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(1)中裂解液包含Tris 40-60mM，EDTA 10-20mM，NaCl 0.1-0.9M，十二烷基-N-甜菜碱0.1％-0.3％，GuHCl 60％-75％，NLS0.6％-0.9％，TritonX100 3％-5％，NH4Cl 0.15％-0.24％、巯基乙醇0.5％-2.5％。
3.如权利要求2所述的提取的方法，其特征在于，所述裂解液包含Tris 55mM，EDTA15mM，NaCl 0.3M，十二烷基-N-甜菜碱0.2％，GuHCl 75％，NLS 0.6％，TritonX100 3％，NH4Cl 0.18％、巯基乙醇1％。
4.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(1)中蛋白酶K溶液的浓度为1.7-2.2mg/mL。
5.如权利要求4所述的提取的方法，其特征在于，蛋白酶K的浓度为2mg/mL。
6.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(2)中DNA结合液为乙醇，异丙醇或乙二醇。
7.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(2)中磁珠悬浮液为包被硅基的直径为50-1000nm的磁性微球水溶液。
8.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(3)中洗涤液1为pH8.0、含50mM的Tris-HCl，200mM的氯化钠50％的乙醇溶液。
9.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(3)中洗涤液2为70-80％的乙醇溶液。
10.如权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，步骤(3)的洗脱液为pH8.0的TE缓冲液，含有10mM Tris-HCl，1mM EDTA。
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