[发明专利]一种固液相结合制备Bulevirtide的方法

说明书

本发明涉及多肽药物制备领域，公开了一种固液相结合制备Bulevirtide的方法，该方法包括以下步骤：采用固相合成四个保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到保护的Bulevirtide，然后裂解脱除保护基得到Bulevirtide粗肽。本发明通过采用特定的四个保护的肽片段液相合成Bulevirtide，不仅可以有效抑制或减少缺失肽、消旋肽等杂质的产生，提高产物的纯度和收率，而且在制备过程中可实现高通量、低成本、纯化易、效率高的特点，是一种具有广泛的实用价值和应用前景的Bulevirtide制备方法。

技术领域

本发明涉及多肽药物制备领域，具体涉及一种固液相结合制备Bulevirtide的方法。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)是引起乙型肝炎的病原体。全球大约有20亿的慢性HBV感染患者，不过其中大多数都属于急性感染，人体的免疫系统能够迅速发挥作用而彻底清除乙肝病毒。另外有3.8亿感染患者属于慢性感染，病毒会藏匿于组织和器官中而无法被免疫系统和药物彻底清除，需长期治疗。

丁型肝炎病毒(HDV)是HBV的卫星亚病毒，必须在HBV的辅助下才能复制增殖。丁型肝炎要在感染乙型肝炎的基础上或与乙型肝炎病毒同时感染才能感染，与慢性HBV感染相似，但更为严重，常常迅速发展成肝硬化和肝衰竭。

肝细胞表面一种叫做肝脏胆汁酸转运体(NTCP，牛磺胆酸钠共转运多肽)的蛋白能够与HBV/HDV包膜蛋白的关键受体结合域发生特异性相互作用，正是HBV/HDV感染宿主细胞所需的受体。Hepcludex是一款首创的(first-in-class)病毒进入抑制剂，能抑制肝细胞表面的HBV/HDV受体NTCP，并防止再生细胞的感染和病毒在肝内的传播。

Hepcludex的原研公司为MYR GmbH，活性成分是Bulevirtide Acetate，Bulevirtide结构式最先在PCT/EP2008/000591专利文献中报道，氨基酸序列如下：

Myristony-Gly-Thr-Asn-Leu⁵-Ser-Val-Pro-Asn-Pro¹⁰-Leu-Gly-Phe-Phe-Pro¹⁵-Asp-His-Gln-Leu-Asp²⁰-Pro-Ala-Phe-Gly-Ala²⁵-Asn-Ser-Asn-Asn-Pro³⁰-Asp-Trp-Asp-Phe-Asn³⁵-Pro-Asn-Lys-Asp-His⁴⁰-Trp-Pro-Glu-Ala-Asn⁴⁵-Lys-Val-Gly-NH₂。

Hepcludex是欧洲第一个被批准用于成人慢性丁型肝炎病毒(HDV)感染和代偿性肝病的治疗方案。

Hepcludex治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染处于II期临床阶段，MYRPharmaceuticals在欧洲肝病学会年会上报道了Hepcludex一项IIb期研究的积极结果。数据显示：接受Bulevirtide和聚乙二醇干扰素α联合治疗48周后，有超过50％的HBV/HDV共感染患者体内已经检测不到HDVRNA。同时，也有一部分受试者体内的乙肝表面抗原(HBsAg)达到了无法检测的水平。更为重要的是，这种效应在停药之后仍能持续，这也意味着Bulevirtide未来有望成为治愈乙肝的一个选择。

CN111574594A公开了一种Bulevirtide的制备方法，采用了特殊的保护氨基酸片段Myristony-Gly-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Val-Pro-Asn(Trt)-Pro-Leu

-Gly-Phe-Phe-Pro-OH进行制备Bulevirtide，15个氨基酸大片段的溶解性比较差，实际生产过程中，采用该片段制备Bulevirtide时，收率低，不利于工业生产。