[发明专利]用于纯化人纤维蛋白原的离子交换层析用缓冲液及填料

权利要求书

1.离子交换层析用组合物在降低纤维蛋白原中的磷酸三丁酯残留中的用途，所述离子交换层析用组合物包含以下两个组分：

组分1：离子交换层析用缓冲液；所述离子交换层析用缓冲液包括平衡缓冲液，洗涤缓冲液和洗脱缓冲液；所述平衡缓冲液为5mM的Tris缓冲液，所述平衡缓冲液的pH为8.5；所述洗涤缓冲液由NaCl和Tris的水溶液组成，其中NaCl的浓度为30mM，Tris的浓度为5mM，所述洗涤缓冲液的pH为8.5；所述洗脱缓冲液由NaCl和Tris的水溶液组成，其中NaCl的浓度为100mM，Tris的浓度为5mM，所述洗脱缓冲液的pH为8.5；

组分2：离子交换层析用填料，所述离子交换层析用填料为聚甲基丙烯酸酯类阴离子交换树脂；

所述降低纤维蛋白原中的磷酸三丁酯残留包括以下步骤：用平衡缓冲液平衡层析填料，将经病毒灭活后的纤维蛋白原上柱，先用洗涤缓冲液淋洗，再用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液，得到纯化后的纤维蛋白原；

所述经病毒灭活后的纤维蛋白原是按照以下方法制得的：

（a）取冷沉淀，加水相溶剂溶解得到冷沉淀溶解液；

（b）将冷沉淀溶解液经氢氧化铝吸附，离心，取上清，过滤，保留滤液；

（c）在滤液中加入聚山梨酯80和磷酸三丁酯，灭活，得到经病毒灭活后的纤维蛋白原。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述离子交换层析用填料选自Capto Q、Fractogel EMD TMAE(M)或Fractogel EMD DEAE(M)。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述离子交换层析用填料为FractogelEMD DEAE(M)。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：步骤（a）中，所述冷沉淀是新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀；所述水相溶剂为Tris缓冲液；

和/或，步骤（b）中，所述氢氧化铝的用量为冷沉淀的1wt.%~5wt.%，所述吸附的时间为10~20分钟，所述吸附的温度为20~35℃；

和/或，步骤（c）中，所述聚山梨酯80的用量为滤液的0.5wt.%~2.0wt.%，所述磷酸三丁酯的用量为滤液的0.1wt.%~0.5wt.%，所述灭活的时间为4~8小时，所述灭活的温度为24~26℃。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：步骤（a）中，所述水相溶剂为10~30mM、pH为6.0~7.5的Tris缓冲液；

和/或，步骤（b）中，所述氢氧化铝的用量为冷沉淀的2wt.%，所述吸附的时间为15分钟，所述吸附的温度为25℃；

步骤（c）中，所述聚山梨酯80和磷酸三丁酯的质量比为10：3，所述聚山梨酯80的用量为滤液的1wt.%，所述灭活的时间为6小时，所述灭活的温度为25℃。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：步骤（a）中，所述水相溶剂为20mM、pH为6.8的Tris缓冲液。