[发明专利]等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂，其特征在于，所述试剂包括如下用于检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的环介导等温核酸扩增引物组：

第一外引物SEQ ID No.1、第二外引物SEQ ID No.2、第一内引物SEQ ID No.3、第二内引物SEQ ID No.4、第一环引物SEQ ID No.5、第二环引物SEQ ID No.6、第三外引物SEQ IDNo.7、第四外引物SEQ ID No.8、第三内引物SEQ ID No.9、第四内引物SEQ ID No.10、第三环引物SEQ ID No.11、第四环引物SEQ ID No.12、第五外引物SEQ ID No.13、第六外引物SEQ ID No.14、第五内引物SEQ ID No.15、第六内引物SEQ ID No.16、第五环引物SEQ IDNo.17、第六环引物SEQ ID No.18。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括可视化恒温扩增试剂，且，所述可视化恒温扩增试剂包括如下组分：

聚合酶、pH染料、等温扩增缓冲液。

3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于：所述聚合酶选自Bst聚合酶；和/或，

所述pH染料选自间甲酚紫；和/或，

所述等温扩增缓冲液包括如下组分：KCl、MgSO₄、吐温20、dNTPs和无核酸酶水。

4.一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～3任一所述的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：核酸提取耗材、阳性质控品，阴性质控品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述核酸提取耗材包括核酸提取液和用于核酸提取的器件，其中，所述核酸提取液选自处理液、裂解液、清洗液、洗脱液中的至少一种，所述器件选自取液器、核酸裂解容器、核酸富集器中的至少一种；和/或，

所述阳性质控品选自布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的核酸模板；

所述阴性质控品选自无核酸酶水。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述第一外引物SEQ ID No.1、所述第二外引物SEQ ID No.2、所述第三外引物SEQ ID No.7、所述第四外引物SEQ ID No.8、所述第五外引物SEQ ID No.13、所述第六外引物SEQ ID No.14的使用终浓度均为1.8～2.0μM；

所述第一内引物SEQ ID No.3、所述第二内引物SEQ ID No.4、所述第三内引物SEQ IDNo.9、所述第四内引物SEQ ID No.10、所述第五内引物SEQ ID No.15、所述第六内引物SEQID No.16的使用终浓度均为57.6～58μM；

所述第一环引物SEQ ID No.5、所述第二环引物SEQ ID No.6、所述第三环引物SEQ IDNo.11、所述第四环引物SEQ ID No.12、所述第五环引物SEQ ID No.17、所述第六环引物SEQID No.18的使用终浓度均为20～22μM。

8.一种检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

获取待检测样品的核酸；

将所述待检测样品的核酸与权利要求1-3任一所述的试剂或权利要求4-7任一项所述的试剂盒提供的等温扩增试剂进行混合并进行环介导等温核酸扩增处理；

根据所述环介导等温核酸扩增处理的混合液所含的pH染料显示颜色，进行比对，对所述待检测样品进行分析判断。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，获取所述待检测样品的核酸的方法包括如下步骤：

对待检测样品进行裂解处理，获得含待检测样品核酸的裂解液；

将所述裂解液经过核酸富集器吸附处理，并对被吸附的待检测样品核酸进行清洗处理，后进行核酸洗脱处理。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述环介导等温核酸扩增处理的温度为60-70℃。