[发明专利]等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂、试剂盒及其应用

说明书

本申请涉及分子生物学检测技术领域，提供了一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种(布氏冈比亚锥虫、布氏罗德西亚锥虫)的试剂、试剂盒及其应用，所述试剂包括如下用于检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种(布氏冈比亚锥虫、布氏罗德西亚锥虫)的SEQ ID No.1～SEQ ID No.18的环介导等温核酸扩增引物组，用于检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种(布氏冈比亚锥虫、布氏罗德西亚锥虫)灵敏度高，重复性好、假阴性及假阳性低，检测准确率高，还能够实现通过裸眼观察颜色变化而直接进行结果判断。

技术领域

本申请属于分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂、试剂盒及其应用，具体涉及一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种(布氏冈比亚锥虫、布氏罗德西亚锥虫)的试剂、试剂盒及其应用。

背景技术

非洲锥虫病也称为睡眠病，由布氏冈比亚锥虫(Trypanosoma brucei gambiense)和布氏罗得西亚锥虫(Trypanosoma brucei rhodesiense)引起，前者分布于非洲西部和中部，传播媒介是须舌蝇；后者分布于非洲东部，传播媒介是刺舌蝇。布氏冈比亚锥虫引起的昏睡病占所有报告病例的95％以上，且常为慢性感染。患者可感染数月或甚至数年而没有明显的症状。出现症状时，患者常常已到疾病晚期，中枢神经系统受到影响。布氏罗得西亚锥虫通常引起急性感染，在感染之后数月或数周可观察到最初的症状，患者的中枢神经系统受到损害。两种非洲锥虫所引起的非洲锥虫病若不及时治疗，均会造成中枢神经系统的致命性的损害，甚至造成死亡。

至目前为止，布氏锥虫早期诊断依旧是一个世界性难题。目前常见的检测方法是形态学检测和血清学检测。这两种传统的检测方法均存在着特异性、灵敏度的问题。

多种不同的聚合酶链反应(PCR)测试可用于检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种(布氏冈比亚锥虫、布氏罗德西亚锥虫)DNA。借助该测定，最终可能实现特异性且灵敏的诊断程序。使用这种特定方法，即使寄生虫的量非常低，仍然可以检测并区分出布氏锥虫种及布氏锥虫亚种(布氏冈比亚锥虫、布氏罗德西亚锥虫)。但目前PCR是荧光染料，其检测的通病就是需要专业人员操作和专业昂贵仪器。

另外，现有待测样品核酸的需要移液器、枪头、离心机、恒温金属浴和PCR仪等昂贵且不便于携带的仪器，且提取需要专业人士进行专业操作，这直接导致现有样本核酸提取和PCR检测不方便，且需要专业人员操作，且成本高。

发明内容

本申请的目的在于提供一种检测等温扩增检测诺氏疟原虫的试剂、试剂盒以及其应用，旨在解决现有技术荧光PCR检测方法操作需要专业操作，而且成本高，检测不方便的问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂，所述试剂包括如下用于检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的环介导等温核酸扩增引物组：

第一外引物SEQ ID No.1、第二外引物SEQ ID No.2、第一内引物SEQ ID No.3、第二内引物SEQ ID No.4、第一环引物SEQ ID No.5、第二环引物SEQ ID No.6、第三外引物SEQID No.7、第四外引物SEQ ID No.8、第三内引物SEQ ID No.9、第四内引物SEQ ID No.10、第三环引物SEQ ID No.11、第四环引物SEQ ID No.12、第五外引物SEQ ID No.13、第六外引物SEQ ID No.14、第五内引物SEQ ID No.15、第六内引物SEQ ID No.16、第五环引物SEQ IDNo.17、第六环引物SEQ ID No.18。

第二方面，本申请提供一种等温扩增检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的试剂盒，所述试剂盒包括试剂。

第三方面，本申请提供一种检测布氏锥虫种及布氏锥虫亚种的方法，所述方法包括如下步骤：

获取待检测样品的核酸；