[发明专利]一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒

权利要求书

1.一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：RT-qPCR预混液，RT-qPCR酶，阳性质控品，阴性质控品；

其中，RT-qPCR预混液由一步反应RT-qPCR缓冲液，以及登革病毒非编码区高度保守序列正向特异性引物、登革病毒非编码区高度保守序列反向特异性引物、登革病毒探针；埃及伊蚊核糖体RNA正向特异性引物、埃及伊蚊核糖体RNA反向特异性引物、埃及伊蚊核糖体RNA探针；白纹伊蚊核糖体RNA正向特异性引物、白纹伊蚊核糖体RNA反向特异性引物、白纹伊蚊核糖体RNA探针组成；

所述登革病毒正向特异性引物的序列为Sequence ID No.1，为CAGGTGGAAGGGCGTACAAC；

所述登革病毒反向特异性引物的序列为Sequence ID No.2，为CTCCCGTGACTGTAGCCAGA；

所述登革病毒探针的序列为Sequence ID No.3，为FAM-ACTGCCGGAGACCCTGGAGACATTGCT-BHQ1；

所述埃及伊蚊正向特异性引物的序列为Sequence ID No.4，为TCCGCCAAAAGCAGAACCTG；

所述埃及伊蚊反向特异性引物的序列为Sequence ID No.5，为TCGGCCGGGATGTAGATGTT；

所述埃及伊蚊探针的序列为Sequence ID No.6，为VIC-TCCGTGCGGCCAAGTATGCCAAGAAGT-BHQ1；

所述白纹伊蚊正向特异性引物的序列为Sequence ID No.7，为TCCAGAATGCGTTACGTGGC；

所述白纹伊蚊反向特异性引物的序列为Sequence ID No.8，为CCTTCAGCTCGTTGACCACC；

所述白纹伊蚊探针的序列为Sequence ID No.9，为Cy5-ACGCCAGCCCATCGAATGCCGACAT-BHQ2。

2.根据权利要求1所述的一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒，其特征在于，所述RT-qPCR酶预混液，包括反转录酶和热启动Taq DNA聚合酶。

3.根据权利要求1所述的一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品为含有登革病毒、埃及伊蚊和白纹伊蚊的目的基因片段的合成质粒混合物，所述阴性质控品为生理盐水。

4.根据权利要求1所述的一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒，其特征在于：

所述一步反应RT-qPCR的初始缓冲液浓度为2倍浓度；

所述RT-qPCR酶的初始预混液浓度为25倍浓度；

所述登革病毒正向特异性引物的初始浓度为10μm/L，所述登革病毒反向特异性引物的初始浓度为10μm/L，所述登革病毒探针的初始浓度为10μm/L；

所述埃及伊蚊正向特异性引物的初始浓度为10μm/L，所述埃及伊蚊反向特异性引物的初始浓度为10μm/L，所述埃及伊蚊探针的初始浓度为10μm/L；

所述白纹伊蚊正向特异性引物的初始浓度为10μm/L，所述白纹伊蚊反向特异性引物的初始浓度为10μm/L，所述白纹伊蚊探针的初始浓度为10μm/L。

5.根据权利要求1所述的一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒，其特征在于：

所述一步反应RT-qPCR缓冲液的应用浓度为1倍浓度；

所述RT-qPCR酶预混液的应用浓度为1倍浓度；

所述登革病毒正向特异性引物的应用浓度为0.2μm/L，所述登革病毒反向特异性引物的应用浓度为0.2μm/L，所述登革病毒探针的应用浓度为0.1μm/L；

所述埃及伊蚊正向特异性引物的应用浓度为0.2μm/L，所述埃及伊蚊反向特异性引物的应用浓度为0.2μm/L，所述埃及伊蚊探针的应用浓度为0.1μm/L；

所述白纹伊蚊正向特异性引物的应用浓度为0.2μm/L，所述白纹伊蚊反向特异性引物的应用浓度为0.2μm/L，所述白纹伊蚊探针的应用浓度为0.1μm/L。

6.根据权利要求1所述的一种同时用于伊蚊分类监测和登革病毒检测的试剂盒，其特征在于：

所述一步反应RT-qPCR的初始缓冲液的反应体系配制加入量为25μl；

所述RT-qPCR酶的初始预混液的反应体系配制加入量为2μl；

所述登革病毒正向特异性引物的反应体系配制加入量为1μl，所述登革病毒反向特异性引物的反应体系配制加入量为1μl，所述登革病毒探针的反应体系配制加入量为0.5μl；

所述埃及伊蚊正向特异性引物的反应体系配制加入量为1μl，所述埃及伊蚊反向特异性引物的反应体系配制加入量为1μl，所述埃及伊蚊探针的反应体系配制加入量为0.5μl；

所述白纹伊蚊正向特异性引物的反应体系配制加入量为1μl，所述白纹伊蚊反向特异性引物的反应体系配制加入量为1μl，所述白纹伊蚊探针的反应体系配制加入量为0.5μl。