[发明专利]一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法

说明书

一种电渗析制备1,4‑丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，该方法包括以下步骤：（1）采用发酵法获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液；（2）获得菌体；（3）清洗菌体；（4）破碎菌体；（5）获得腺苷蛋氨酸粗液；（6）超滤除杂；（7）纳滤浓缩、除无机盐；（8）电渗析成盐；（9）脱色提纯；（10）干燥。本发明具有操作简单、收率高、成本低、绿色环保的特点，适于工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法。

背景技术

1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸分子C15H23N6O5S+·C4H9O6S2-·0.65C4H10O6S2，分子量758.55。是由Knool公司开发，于1993 年在意大利以Tranametil( 思美泰) 商品名上市，用于治疗胆汁淤积。其活性成分为腺苷蛋氨酸阳离子，1,4-丁二磺酸作为阴离子与其配对达到稳定其结构的作用，不具药理活性。

腺苷蛋氨酸(Ademetionine) 是甲硫氨酸在生物体内的活性形式，作为重要的甲基、巯基和氨丙基供体参与多种代谢。临床上被广泛用于多种肝脏相关疾病的治疗，如肝内胆汁淤积、药物性肝损伤、病毒性肝炎和酒精性肝病等。

中国专利申请201310379731.7中公开了一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，该制备方法是：将腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液酸化、过滤后得湿菌体，干燥，冻融处理，将无机强酸的水溶液和湿菌体混合均匀；将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，并添加无机强酸的水溶液，收集滤液；将滤液过纳滤膜，得浓缩液A ；过中等极性大孔吸附树脂柱，水洗后得流出液B ；过H+型大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，用1,4-丁二磺酸洗脱H+型大孔酸性阳离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C 合并；将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；将浓缩液D 和1,4- 丁二磺酸混合，调节1,4- 丁二磺酸与腺苷蛋氨酸比例，干燥后即得。该申请中过H+型大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，包括pH 值调节至4.5 ～6.0 后，用水洗脱除盐，用0.01 ～0.02mol/L 的醋酸水溶液洗脱除杂，再用水洗脱除醋酸，用pH 值为3 ～5 的1,4-丁二磺酸洗脱所述的H+型大孔酸性阳离子交换树脂柱。分离纯化工序繁琐、复杂，收率低。且pH 值为3 ～5 的1,4-丁二磺酸需要由1,4-丁二磺酸钠脱钠制备，进一步增加了分离纯化的过程。另外树脂活化、再生需要用到酸溶液，增加了废水的排放。

因此，研究开发新的分离纯化技术，实现能通过1,4-丁二磺酸钠和初步提纯后的腺苷蛋氨酸，得到1,4丁-二磺酸腺苷蛋氨酸盐粗品，粗品再经纯化、干燥，得到纯度高的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸干燥产品的方法，是目前1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐生产中亟待解决的难题。

发明内容

本发明其目的就在于提供一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，以解决上述背景技术中的问题，该方法具有操作简单、收率高、成本低、绿色环保，适于工业化生产的特点。

为实现上述目的而采取的技术方案是，一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法，该方法包括以下步骤：

（1）采用发酵法获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液，所述的发酵法包括以下步骤：①将腺苷蛋氨酸产生菌接种于斜面培养基进行斜面培养；②将生长好的斜面接种于种子培养基进行种子培养；③将种子液接种至基础培养基进行好氧发酵；④当培养液糖浓度降至≤0.05g/L时，流加补糖培养基，调节发酵罐参数，使DO≥30%，补糖培养基补加流速为8～12g糖/h/L基础培养基；⑤当发酵液的生物量至0.15g/mL～0.2g/mL（湿菌体/发酵液）时，补加流速为，补加流速为0.8～1.5g蛋氨酸/h/L基础培养基；⑥发酵至48～72h时，获得腺苷蛋氨酸的酵母发酵液，下罐；

（2）获得菌体：下罐后的酵母发酵液，用陶瓷膜设备，去除大部分发酵残留培养基，至湿菌体浓度至50%～60%，获得菌液；

（3）清洗菌体：在陶瓷膜设备中，将上述菌液，加纯化水清洗，至菌体浓度至50%～60%，出水电导率＜1500μs/min；