[发明专利]衰老相关差异表达基因在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了衰老相关差异表达基因在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，属于生物医学技术领域。本发明经过筛选与验证，首次发现衰老相关差异表达基因SIRT3、E2F3、IRS2这三个基因的蛋白表达水平及m6A RNA甲基化修饰水平，可用于鉴定及诊断细胞的衰老的状态，解决了目前在细胞衰老领域存在的诊断标志物欠缺问题，为细胞早衰及年龄相关疾患的早期预防和靶向治疗提供参考依据。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及衰老相关差异表达基因在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用。

背景技术

细胞衰老是一种细胞周期停滞的永久状态。衰老细胞会随着机体衰老而累积，释放一系列促炎、促凋亡等因子，导致了与年龄相关的疾病和慢性疾病的发生，如动脉粥样硬化、2型糖尿病、关节炎、特发性肺纤维化和肝病等。因此，衰老细胞的鉴定、表征和药理消除在衰老研究领域受到关注。

细胞衰老是器官及个体衰老的基础，其过程受遗传和环境等多种复杂因素影响。长期以来，科学界对调控衰老的具体分子机制尚不明确，对细胞衰老的鉴定、诊断及干预的靶点也缺乏系统的标志物。

细胞衰老是正常衰老和衰老病理的核心发育程序，在转录后水平受到强烈调控。近年来，m6A RNA的甲基化在年龄相关疾患的发生发展及其治疗和预后的关联变得非常紧密，包括肥胖、免疫调节及肿瘤等，可调节与细胞增殖、迁移侵袭、细胞周期进程、细胞凋亡和自噬过程相关的靶基因的表达。在衰老的细胞中，我们发现，年轻细胞和衰老细胞差异表达的基因在RNA甲基化水平具有不同的特征，这种差异特征，为衰老的鉴定提供了证据与方法，并为年龄相关疾患的干预提供了治疗的靶点。

SIRT3位于线粒体内，基因敲除后能使小鼠发展多种衰老疾病，能够调节线粒体生物学中的几乎每种主要功能，包括ROS解毒，ATP生成等，多种研究显示SIRT3的衰减或消融与多种衰老疾病的加速发展有关。目前未见报道E2F3在衰老过程中的调控作用，但m6A修饰参与miRNA/E2F3介导的胃癌细胞增殖抑制。IRS2在肿瘤的发生和治疗中发挥重要作用的因子，也有报道其在神经退行性疾病中发挥作用，但它们的m6A修饰与衰老之间的联系报道尚未有报道。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点与不足，本发明的目的在于提供衰老相关差异表达基因在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

衰老相关差异表达基因在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用。

进一步地，所述的衰老相关差异表达基因为如下基因的一种或多种组合：SIRT3(NCBI登录号：NM_012239.6)、E2F3(NCBI登录号：NM_001949.5)、IRS2(NCBI登录号：NM_003749.3)。

进一步地，所述的细胞衰老诊断试剂盒是通过分析细胞中衰老相关差异表达基因的蛋白表达情况，和/或m6A RNA甲基化修饰水平，从而诊断细胞衰老情况，即，

(1)当分析结果为如下情况的一种或多种组合时，判断细胞进入衰老状态：

a.SIRT3蛋白表达升高；

b.E2F3蛋白表达升高；

c.IRS2蛋白表达升高或降低；

d.SIRT3 m6A RNA甲基化修饰水平升高；

e.E2F3 m6A RNA甲基化修饰水平升高；

f.IRS2 m6A RNA甲基化修饰水平升高；

(2)当分析结果为如下情况的一种或多种组合时，判断细胞为复制性衰老细胞：

a.IRS2蛋白表达降低；

b.IRS2 m6A RNA甲基化修饰水平升高；