[发明专利]一种早产预测标志物的羊水蛋白质组学检测方法及应用

说明书

本发明公开一种早产预测标志物的羊水蛋白质组学检测方法及应用，涉及基因工程技术领域。通过液相色谱‑质谱联用的方法获得早产患者(排除宫颈因素)和足月产正常对照孕妇羊水差异表达蛋白；对差异表达蛋白进行GO功能表征及KEGG通路分析；应用酶联免疫吸附试验对选定的候选蛋白进行验证。本发明使用TMT标记的定量蛋白质组学方法比较了早产患者(排除宫颈因素)和足月产孕妇羊水中的蛋白表达差异。生物信息学分析表明，44个差异表达蛋白和9个主要途径可能参与早产的发生。随后的ELISA检测证实，SEPRIN‑A1和IGFBP‑4与早产有显著相关性，为早产的预防和机制阐明提供了新的思路和途径。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种早产预测标志物的羊水蛋白质组学检测方法及应用。

背景技术

早产是指妊娠满28周而不足37周分娩。全世界每年有超过1500万早产儿出生，其中超过100万发生夭折。目前关于早产发生的机制尚不明确。细菌感染、蜕膜出血和血管疾病、蜕膜老化、母胎免疫耐受异常、孕酮撤退等都可以导致分娩提前启动，但其潜在病因尚未明确阐明。

研究表明，75％-85％的早产为自发性，无明确病因，大部分早期诊断的早产均可预防。因此，迫切需要寻找预防早产发生的生物标志物。到目前为止，可以通过经阴道超声测量妊娠16-22周之间的宫颈长度预测早产，然而尚有大部分早产不能通过该途径提前发现。羊水(AF)在羊膜囊中围绕胎儿，通常用于产前诊断。鉴于AF携带的内容物来自胎盘和胎儿，反映了母体和胎儿状态，可能成为妊娠相关疾病潜在生物标志物的来源。

基于AF蛋白质组学的方法为全面了解影响孕周的基本生物学机制提供了新的视角，并可识别SPTD的生物标志物。现在，蛋白质组学已经被应用于诊断各种类型的产科疾病，如绒毛膜羊膜炎，未足月胎膜早破(PPRM)。

通过上述分析，现有技术存在的问题为：

(1)现有技术中，没有利用识别与不明原因早产相关的生物标志物并探索其信号通路，对早产的信息获取不能提供准确支持；

(2)宫颈扩张作为早产的一个重要因素，在以往的研究中多被忽略。

(3)现有技术中，对丝氨酸蛋白酶抑制剂A1(SEPRIN-A1)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)的调节机制不明确。

解决以上业内存在问题的意义为：

早产已成为引起新生儿死亡的最常见原因，早产儿即使生存下来也可能会伴有多种器官功能发育不成熟，身体发育滞后，感知和认知功能障碍，学习障碍以及精神行为异常等问题，严重影响子代的健康及生命质量。自发性早产早期标志物的研发，对于早产的预防、增强母胎安全、降低出生缺陷的发生具有重要意义，是利国利民的大事。

发明内容

为克服相关技术中存在的问题，本发明公开实施例提供了一种早产预测标志物的羊水蛋白质组学检测方法及应用。

本发明的目的在于采用对孕中期羊水进行蛋白质组学分析，找到差异表达蛋白，探讨其与早产的关系。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)验证分析结果。本发明旨在排除宫颈因素识别与不明原因早产相关的生物标志物。

根据本发明公开实施例的第一方面，提供一种早产预测标志物的羊水蛋白质组学检测方法，包括：

步骤一，通过液相色谱-质谱联用的方法获得羊水差异表达蛋白；

步骤二，对差异蛋白的GO功能表征及KEGG通路进行分析；

步骤三，应用酶联免疫吸附试验对选定的候选蛋白进行验证。

在本发明一实施例中，所述步骤一具体包括：