[发明专利]293T多靶点靶细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明属于细胞免疫工程技术领域，具体涉及一种293T多靶点靶细胞及其制备方法和应用。该靶细胞包括表达抗原CEA的核苷酸片段a、表达抗原CD19的核苷酸片段b、表达抗原BCMA的核苷酸片段c、表达抗原CD70的核苷酸片段d。其制备方法是选择一款基础细胞(293T细胞)，通过外源构建的方式构建，再通过流式检测其抗原表达，分选出同时高表达抗原CEA、CD19、BCMA和CD70的靶细胞作为目标细胞。该靶细胞外源表达多个抗原可用于多个靶点的检测，将需要重复4次的操作浓缩为一次的操作，减少了细胞培养工作量，大大节省了时间以及成本，而且检测时本底因子分泌量正常，因子检测结果稳定、信噪比更高，更有利于后续产品的质量检测。

技术领域

本发明属于细胞免疫工程技术领域，具体涉及一种293T多靶点靶细胞及其制备方法和应用。

背景技术

现有细胞体外药效评价方法中，靶细胞通常是对应适应症的单个靶点细胞，例如B系急性淋巴细胞白血病的CAR-T细胞评价，对应靶细胞为内源表达CD19的NALM6细胞，多发性骨髓瘤的CAR-T细胞评价，对应靶细胞为内源表达BCMA的MM.1S细胞，若要评价多种适应症的CAR-T细胞药效，则需培养多个肿瘤细胞，这样不仅工作量较大，而且一次性培养多种细胞，出错率也会大大增加；另外，细胞体外药效评价实验方法中，不同适应症会有一个不同的阴性对照靶细胞，目前，大多数阴性单个靶点的对照靶细胞存在本底因子分泌量较高的问题，影响了体外药效整体评价，影响药物的质量控制。

293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，从而提高外源基因的表达水平。因此293T细胞广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白，且该细胞易培养、生长快，为了达到实验的方便以及体外药效整体评价的好的效果，本发明采用293T细胞作为靶细胞，但是在293T细胞上表达多种抗原，可能会存在多种抗原之间互相影响表达、表达多个抗原也可能会对293T细胞本身造成一定的影响，本发明基于以上的目的以及克服了实验过程中的重重不确定因素，最后构建成了针对多个靶点的293T标准化细胞。

发明内容

有鉴于此，本发明在于提供一种靶细胞，所述靶细胞可以同时表达抗原CEA、抗原CD19、抗原BCMA和抗原CD70，细胞上表达多种抗原的靶细胞，可能会存在多种抗原之间互相影响表达、表达多个抗原也可能会对靶细胞本身造成一定的影响，本发明技术方案克服了重重不确定因素，最后构建成了针对多个靶点的靶细胞。

所述靶细胞包括表达抗原CEA的核苷酸片段a和表达抗原CD19的核苷酸片段b和表达抗原BCMA的核苷酸片段c和表达抗原CD70的核苷酸片段d。

进一步，所述靶细胞还包括表达标记蛋白的核苷酸片段。

进一步，所述核苷酸片段a和/或所述核苷酸片段b和/或所述核苷酸片段c和/或所述核苷酸片段d分别连在非/同一个表达载体上；连接于非同一个表达载体时，所述表达载体的类型相同或者不同。

优选地，所述表达载体可以是病毒载体，也可以是其他适用的真核或原核表达载体。

进一步，所述靶细胞是293T作为基础细胞，通过外源构建的方式进行改造的，改造得到“293T-CEA-CD19-BCMA-CD70-Luc-GFP靶细胞”或“293T-CEA-CD19-BCMA-CD70靶细胞”。

本发明进一步提供前述的靶细胞的制备方法，该制备方法是选择一款基础细胞，通过外源构建的方式构建，再通过流式检测其抗原表达，分选出同时高表达四种抗原(抗原CEA、抗原CD19、抗原BCMA和抗原CD70)的靶细胞作为目标细胞。