[发明专利]一种用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，所述用于检测静脉血栓代谢的标志物为PAI-1 4G/5G、F5 G1691A两个基因，试剂盒针对PAI-1 4G/5G、F5G1691A两个基因的多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：扩增反应液、PAI-1 4G/5G测序引物、F5 G1691A测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，所述PAI-1 4G/5G的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:2所示；所述F5 G1691A的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:3～SEQ ID NO:4所示。

3.根据权利要求1所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，所述PAI-1 4G/5G测序引物、F5 G1691A测序引物分别如序列表SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6所示。

4.根据权利要求1所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，所述PAI-1 4G/5G和F5 G1691A共用一个分配指令如序列表SEQ ID NO:9所示。

5.根据权利要求1所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增反应液包括PAI-1 4G/5G和F5 G1691A特异性扩增引物、血液样品直接PCR预混液和海藻糖。

6.根据权利要求1所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括浓度为20ng/ul的PAI-1 4G/5G和F5 1691GA型基因组DNA。

7.根据权利要求1所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒，其特征在于，扩增所采用的PCR管为密封薄膜且薄膜可穿透的PCR管。

8.一种采用根据权利要求1～7任一项所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a.将所述扩增反应液与4ul待测EDTA抗凝全血混合均匀进行PCR扩增；

b.将含链霉亲和素标记微珠的结合液与扩增产物进行混合；

c.加入洗涤缓冲液漂洗；

d.变性液处理得到单链产物；

e.加入洗涤缓冲液漂洗；

f.向每个测序管中加入测序酶和测序底物；

g.取一个8排管，自圆滑一端向平端依次加入dATP、dTTP、dGTP、dCTP、PAI-1 4G/5G测序引物、F5 G1691A测序引物、ddGTP；

h.焦磷酸测序。

9.根据权利要求8所述的用于静脉血栓风险评估的检测方法，其特征在于，所述扩增反应体积为20ul体系，体系中血液最大加入量为4ul。

10.一种根据权利要求1～9任一项所述的用于静脉血栓风险评估的检测试剂盒及其检测方法的应用，其特征在于，所述检测试剂盒及其检测方法对PAI-1 4G/5G、F5G1691A进行检测。