[发明专利]一种表达猪非典型瘟病毒融合蛋白的重组果蝇细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种表达猪非典型瘟病毒融合蛋白的重组果蝇细胞系及其制备方法和应用，属于疫苗技术领域。本发明提供的表达猪非典型瘟病毒E2Fc和E2ΔFc融合蛋白的重组果蝇细胞系S2‑aE2Fc或S2‑aE2ΔFc能够用于制备亚单位疫苗，免疫仔猪后能够产生较强的针对猪非典型瘟病毒的特异性免疫反应。利用本发明所述重组果蝇细胞系S2‑aE2Fc和S2‑aE2ΔFc能够获得二聚体形态的aE2蛋白抗原，制备的亚单位疫苗能够激起机体产生更强的体液免疫和细胞免疫反应，可作为一种很有前景的候选基因工程疫苗预防猪非典型瘟病毒引起的仔猪先天性震颤。

技术领域

本发明属于疫苗技术领域，具体涉及一种表达猪非典型瘟病毒融合蛋白的重组果蝇细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

仔猪先天性震颤(Congenital tremor，CT)俗称“仔猪抖抖病”，是发生于新生仔猪的一种神经系统性疾病。发病仔猪由于中枢神经系统(Central nervous system，CNS)的低髓鞘化而表现出头部和四肢的颤抖、阵发性痉挛等临床症状。严重病例可能伴发共济失调而导致仔猪吮乳能力下降，进一步因饥饿和初乳摄入不足而死亡。1922年，Kinsley等在美国首次对这种综合征进行描述^[1]。在一群猪中爆发了一种不明原因引起的疾病，发病仔猪头部摇晃、四肢颤抖，看起来像是在跳舞，因此被称为“跳舞猪疾病”。此后，该病在欧洲、亚洲等一些国家相继报道，提示其具有全球性^[2]。2015年，Hause 等通过宏基因组测序，在美国猪群的血清中检测到了一种新病毒，命名为猪非典型瘟病毒(Atypicalporcinepestivirus，APPV)^[3]。随后的研究表明APPV 可能是引发仔猪先天性震颤的病原体^[4]。虽然在CT感染仔猪中，通过宏基因组测序检测到了其它一些病毒，如星状病毒(Astrovirus)、LINDA病毒 (Lateral-shaking inducing neurodegenerative agent virus)、猪捷申病毒(Porcine teschovirus，PTV)和猪圆环病毒样病毒P1，但是只有APPV在世界范围内得到证明^[5-7]。APPV属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属 (Pestivirus)病毒，基因组由一条单股正链RNA组成，全长约为11kb，其 ORF由3635个氨基酸组成，编码一个多聚蛋白，并被宿主和病毒相应的蛋白酶裂解为4个结构蛋白(C、Erns、E1和E2)8个非结构蛋白(Npro、P7、 NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)^[3]。E2蛋白是瘟病毒属病毒中的主要抗原蛋白^[8,9]，能够诱导机体产生保护性中和抗体，因此是亚单位疫苗开发的主要靶标。

IgGFc片段可作为一种疫苗分子佐剂，显著刺激机体产生粘膜免疫应答、细胞免疫应答以及体液免疫应答^[9]。此外，IgGFc融合蛋白可通过Fc铰链区的二硫键链接形成稳定的二聚体，增加蛋白的稳定性和半衰期^[10]。因此， IgGFc片段是一种有效的分子佐剂，在疫苗开发中具有重要的价值。

目前尚无可用的疫苗来防控APPV的感染。因此，开发一种安全有效的 APPV疫苗对于仔猪先天性震颤的防控至关重要。

参考文献

1.Kinsley,A.T.,Dancing pigs？.Veterinary Medicine 1922,17,123.