[发明专利]一种头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法

权利要求书

1.一种头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：制备对照品贮备液

称取异硫氰酸异丙酯对照品，加丙酮，制成每1ml中含2.4μg异硫氰酸异丙酯的溶液，作为对照品贮备液；

步骤2：制备衍生化反应液

以二乙胺和丙酮按体积比为1:9的混合液，作为衍生化反应液；

步骤3：制备稀释剂

以磷酸盐缓冲液和乙腈按体积比为1:1的混合液，作为稀释剂；

步骤4：制备对照品溶液

精密移取1ml步骤1的对照品贮备液，置于10ml容量瓶，加入1ml步骤2的衍生化反应液，水浴后，用步骤3的稀释剂稀释定容至刻度，作为对照品溶液；

步骤5：制备供试品溶液

精密称取200mg±0.5mg待测定的头孢硫脒供试品，置于10ml容量瓶，加入1ml步骤2的衍生化反应液，水浴后，用步骤3的稀释剂定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

步骤6：制备空白溶液

精密移取1ml步骤2的衍生化反应液，置于10ml容量瓶，水浴后，用步骤3的稀释剂定容至刻度，作为空白溶液；

步骤7：色谱条件

色谱柱为C₁₈柱，以磷酸盐缓冲液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，柱温为20℃-30℃，流速为0.8ml/min-1.2ml/min，紫外检测器，检测波长为240nm；所述梯度洗脱的具体方法是：按体积比，0min-7min，流动相A为50％，流动相B为50％；7min-12min,流动相A为50％至40％，流动相B为50％至60％；12min至22min,流动相A为40％，流动相B为60％；22min-23min,流动相A为40％至50％，流动相B为60％至50％；23min-30min,流动相A为50％，流动相B为50％；

步骤8：测定

分别吸取步骤4的对照品溶液和步骤5的供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，读取数据；对照品溶液峰形对称，理论塔板数2000以上，供试品溶液色谱图中如有异硫氰酸异丙酯峰，与对照品溶液中异硫氰酸异丙酯峰保留时间一致；空白溶液色谱图，无与异硫氰酸异丙酯对照相同的峰出现，即空白溶液无干扰；

根据对照品溶液浓度与相应的色谱峰面积，供试品溶液色谱峰面积，采用外标法，计算得到头孢硫脒供试品中异硫氰酸异丙酯含量。

2.根据权利要求1所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤1中，所述异硫氰酸异丙酯对照品的纯度为97.0％。

3.根据权利要求1所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤3中，所述磷酸盐缓冲液的配制方法是：称取6.95g十二水合磷酸氢二钠和1.29g一水合柠檬酸，加超纯水溶解并稀释至1000ml。

4.根据权利要求1所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤4、步骤5和步骤6中，所述水浴的温度均为25℃，时间均为30min-40min。

5.根据权利要求1所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤5中，所述头孢硫脒供试品的剂型为注射剂。

6.根据权利要求1所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤7中，所述色谱柱为Kromasil 100-5-C₁₈柱，长度为250mm，内径为4.6mm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径为5μm。

7.根据权利要求1所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤7中，所述柱温为25℃，所述流速为1.0ml/min。

8.根据权利要求1-7任一项所述的头孢硫脒中异硫氰酸异丙酯含量的检测方法，其特征在于，步骤8中，所述头孢硫脒供试品中异硫氰酸异丙酯含量按式1计算：

式中，W_S为对照品的称样量，mg；A_S为对照品溶液的峰面积；D_S为对照品溶液的稀释体积，ml；P为对照品含量；A_T为供试品溶液的峰面积；D_S为供试品溶液的稀释体积，ml；W_T为供试品的称样量，mg。