[发明专利]一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其制备

说明书

本发明涉及一种尿微量白蛋白检测试剂盒及器制备。所述试剂盒包括尿微量白蛋白检测卡、尿微量白蛋白稀释液、尿微量白蛋白芯片；所述尿微量白蛋白检测卡包括卡壳和试纸条；所述试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和PVC底板，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次粘贴于PVC底板上；所述结合垫含有荧光标记的尿微量白蛋白抗体和荧光标记的羊抗鸡IgY抗体。本发明试剂盒能够准确定量检测人尿液中微量白蛋白的含量，标记通过化学键将羧基修饰铕荧光纳米微球与抗体连接，标记产物稳定。具有水溶性优、高灵敏度、可准确定量、简便快捷的特点。

技术领域

本发明涉及一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

尿微量白蛋白(mALB)是指在尿液中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中正常蛋白质，人体代谢正常情况下，尿液中白蛋白极少，每升尿液白蛋白不超过20mg，所以叫微量白蛋白。但糖尿病肾病、高血压肾病等早期肾脏受损和心血管疾病并发症等发生时会造成肾脏固有细胞损伤，使肾脏固有细胞结构及功能发生变化而导致白蛋白含量在尿液中升高。尿微量白蛋白见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。

现有技术中测定尿微量白蛋白的方法主要为免疫分析法，即用抗原和抗体特征性反应来对抗原或抗体进行定性和定量测定的分析方法。按标记物种类的不同，免疫分析法主要可分为：放射性免疫分析法、酶免疫分析法、发光免疫分析法、荧光免疫分析法。荧光免疫分析是指用荧光分子对抗体或抗原进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。与其他三种免疫法相比，荧光免疫法具有许多优点：①选择性好；②具有多种测定参数(如荧光各向异性、荧光寿命、荧光量子产率、荧光激发波长、发射波长等)；③灵敏度高；④具有多种检测技术和方法(如导数荧光、同步荧光、荧光偏振、荧光动力学分析法、时间分辨荧光分析法等)。因此可依据实际测定条件的不同加以选择，具有适用性强、选择性好、线性范围较宽的特点，是一种简便实用的分析技术。

目前荧光免疫分析最常用的标记物是有机染料。然而有机染料存在很多缺陷，如大多数荧光试剂存在光漂白现象，导致荧光信号不稳定；荧光试剂有一定的毒副作用；荧光染料的激发光谱比较窄，很难同时激发多种组分，而且其荧光光谱较宽，分布不对称，较难区分不同探针分子的荧光，不能同时检测多种组分；此外，传统的荧光标记方法，只能在生物分子的活性基团上连接少数荧光分子，分析灵敏度较低。因此，研究新型的、高灵敏度、稳定性好的荧光探针是当前荧光免疫分析领域研究的热点。

发明内容

本发明目的是针对现有技术中传统的荧光标记方法，只能在生物分子的活性基团上连接少数荧光分子，分析灵敏度较低的不足，提供一种羧基修饰铕纳米微球荧光免疫层析技术，可实现高灵敏度、可准确定量、水溶性优、简便快捷的定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种尿微量白蛋白检测试剂盒，包括尿微量白蛋白检测卡、尿微量白蛋白稀释液、尿微量白蛋白芯片：

所述尿微量白蛋白检测卡包括卡壳和试纸条；

所述试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和PVC底板，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次粘贴于PVC底板上；

所述结合垫含有荧光标记的尿微量白蛋白抗体和荧光标记的羊抗鸡IgY抗体；

所述硝酸纤维素膜上依次设置有检测线和质控线，检测线、质控线相互平行，间距为3-5mm，检测线靠近加样孔；所述检测线包被有尿微量白蛋白单克隆抗体，质控线包被有鸡IgY抗体。

作为优选，所述检测试纸条的制备方法如下：

(1)荧光纳米微球的制备