[发明专利]一种密码子优化的基因、重组表达载体、重组蛋白及多克隆抗体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种密码子优化的PE_PGRS45基因，其特征在于，所述PE_PGRS45基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种包含权利要求1所述基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的基础质粒包括pMAL-c5x。

3.根据权利要求2所述重组表达载体，其特征在于，所述基因的核苷酸序列位于所述pMAL-c5x的Nde I和HindⅢ酶切位点之间。

4.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

5.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的编码基因的序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。

6.权利要求4或5所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用权利要求2或3所述重组表达载体转化大肠杆菌后，依次进行培养和诱导，得重组蛋白。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在培养时，采用的培养基为含抗生素的LB液体培养基；所述培养的温度为20～37℃，培养的结束标准为培养所得菌液的OD₆₀₀＝0.4～0.6；

在诱导时，采用的培养基包括以下浓度的组分：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、卡那霉素50ug/mL和0.5mM IPTG；

所述诱导的温度为20～37℃，转速为200r/min，时间为12h。

8.一种效价高的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

以权利要求4或5所述重组蛋白为抗原免疫宿主，得抗PE_PGRS45的多克隆抗体。

9.权利要求8所述制备方法制备得到的多克隆抗体在制备诊断结核病试剂盒中的应用。

10.一种用于诊断结核病的试剂盒，其特征在于，包括权利要求7所述制备方法制备得到的多克隆抗体。