[发明专利]一种密码子优化的基因、重组表达载体、重组蛋白及多克隆抗体的制备方法和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种密码子优化的基因、重组表达载体、重组蛋白及多克隆抗体的制备方法和应用。本发明提供了一种密码子优化的PE_PGRS45基因，所述PE_PGRS45基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用本发明所述PE_PGRS45基因能够用于制备效价高的多克隆抗体。本发明具体实施例中试验结果表明，该基因的密码子适应指数(CAI)从0.73增加到0.90。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种密码子优化的基因、重组表 达载体、重组蛋白及多克隆抗体的制备方法和应用。

背景技术

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是引起结核病 (tuberculosis)主要胞内菌。由于卡介苗(BCG)功效低下，抗生素 滥用导致的耐药性增强，使结核病再次威胁全球健康。据世界卫生组 织(WHO)统计，2019年全球范围内，新增加1000万病例，引起 141万患者死亡，是单个传染病导致死亡首要因素。

结核分枝杆菌PE_PGRS45蛋白由Rv2615c基因编码得到的，与PE_PGRS17(Rv0978c)和PE_PGRS18(Rv0980c)具有高度同源性。生物信息学分析发现， PE_PGRS45保守的四肽基序(DEVS/DXXS)丝氨酸残基磷酸化后可竞争性与 caspase-3蛋白结合，参与宿主细胞程序化死亡，暗示PE_PGRS45在结核分枝杆菌 感染中具有重要意义。因此，从PE_PGRS45基因着手寻求一种获得高效价的多克 隆抗体的方法是迫在眉睫的。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种密码子优化的基因、重组表达载体、 重组蛋白及多克隆抗体的制备方法和应用。本发明将PE_PGRS45基因进行密码子 优化，并以此能得到本发明所述PE_PGRS45重组蛋白，进而获得高效价高多克隆 抗体。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种密码子优化的PE_PGRS45基因，所述PE_PGRS45基因核 苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供了一种包含上述基因的重组表达载体，所述重组表达载体的基础 质粒包括包括pMAL-c5x。

优选的，所述基因的核苷酸序列位于所述pMAL-c5x的Nde I和Hind Ⅲ酶切 位点之间。

本发明提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所 示。

本发明提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白的编码基因的序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。

本发明提供了上述重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

利用上述重组表达载体转化大肠杆菌后，依次进行培养和诱导，得重组蛋白。

优选的，在培养时，采用的培养基为含抗生素的LB液体培养基；所述培养的 温度为20～37℃，培养的结束标准为培养所得菌液的OD₆₀₀＝0.4～0.6；

在诱导时，采用的培养基包括以下浓度的组分：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物 5g/L、氯化钠10g/L、卡那霉素50ug/mL和0.5mM IPTG；

所述诱导的温度为20～37℃，转速为200r/min，时间为12h。

本发明提供了一种效价高的多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

以上述重组蛋白为抗原免疫宿主，得抗PE_PGRS45的多克隆抗体。

本发明提供了上述制备方法制备得到的多克隆抗体在制备诊断结核病试剂盒 中的应用。

本发明提供了一种用于诊断结核病的试剂盒，包括上述制备方法制备得到的 多克隆抗体。