[发明专利]一种用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于检测昂丹司琼和托烷司琼的代谢标志物CYP2D6 C100T、CYP2D6 G1846A和CYP2D6*5的基因多态性，所述试剂盒针对CYP2D6 C100T、CYP2D6 G1846A、CYP2D6*5三个基因的多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：扩增反应液、CYP2D6 C100T测序引物、CYP2D6 G1846A测序引物、CYP2D6*5测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6 C100T的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:2所示；所述CYP2D6 G1846A的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:3～SEQ ID NO:4所示；所述CYP2D6*5的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6所示。

3.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6 C100T测序引物、CYP2D6 G1846A测序引物、CYP2D6*5测序引物分别如序列表SEQ ID NO:7～SEQ ID NO:9所示。

4.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6 C100T测序引物对应的测序区域为CYP2D6 C100T待检序列，如序列表SEQID NO:10所示；CYP2D6 G1846A测序引物对应的测序区域为CYP2D6 G1846A待检序列，如序列表SEQ ID NO:11所示；CYP2D6*5测序引物对应的测序区域为CYP2D6*5待检序列，如序列表SEQ ID NO:12所示。

5.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6 C100T、CYP2D6 G1846A和CYP2D6*5共用一个分配指令如序列表SEQ IDNO:9所示。

6.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增反应液包括CYP2D6 C100T、CYP2D6 G1846A、CYP2D6*5特异性扩增引物、血液样品直接PCR预混液和海藻糖。

7.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括浓度为20ng/ul CYP2D6*1*10的型基因组DNA。

8.根据权利要求1所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增反应所采用的PCR管为密封薄膜的PCR管。

9.一种根据权利要求1～8任一项所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a.将所述扩增反应液与4ul待测EDTA抗凝全血混合均匀进行PCR扩增；

b.将含链霉亲和素标记微珠的结合液与扩增产物进行混合；

c.加入洗涤缓冲液漂洗；

d.变性液处理得到单链产物；

e.加入洗涤缓冲液漂洗；

f.向每个测序管中加入测序酶和测序底物；

g.取一个8排管，自圆滑一端向平端依次加入dATP、dTTP、dGTP、dCTP、CYP2D6 C100T测序引物、CYP2D6 G1846A测序引物、CYP2D6*5测序引物、ddATP、ddTTP；

h.焦磷酸测序；

i.确定CYP2D6的基因型。

10.一种根据权利要求1～9任一项所述的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法的应用，其特征在于，所述检测试剂盒及其检测方法对CYP2D6 C100T、CYP2D6 G1846A、CYP2D6*5进行检测。