[发明专利]一种用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述检测试剂盒用于检测昂丹司琼和托烷司琼的代谢标志物CYP2D6C100T、CYP2D6G1846A和CYP2D6*5的基因多态性，所述试剂盒针对CYP2D6C100T、CYP2D6G1846A、CYP2D6*5三个基因的多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：扩增反应液、CYP2D6C100T测序引物、CYP2D6G1846A测序引物、CYP2D6*5测序引物和阳性对照。本发明以血液直扩、快速扩增和优化焦磷酸测序技术为组合对昂丹司琼、托烷司琼药效及不良反应预测相关的基因多态性进行检测，为昂丹司琼、托烷司琼临床使用给出基因角度的建议。

技术领域

本发明涉及一种用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用，属于基因检测领域。

背景技术

术后恶心呕吐(postoperative nausea and vomiting，PONY)在住院手术患者中的发生率为20％，高危PONV患者发生率达80％。同时PONV还可以诱发相关并发症，包括脱水、电解质混乱、切口裂开、出血、吸人性肺炎等。昂丹司琼、托烷司琼为高度选择性的5-羟色胺受体拮抗剂，用于防治术后、化疗及放疗引起的恶心呕吐，然而其在部分患者中疗效不理想。

CYP2D6是昂丹司琼的主要药物代谢酶之一，是CYP酶家族重要的成员之一，虽然它只占肝脏酶总量的2％、9％，却参与20％、30％药物的代谢，包括抗抑郁药、抗心律失常药、抗精神病药、镇痛药等。CYP2D6基因有9个外显子，8个内含子，共编码497种氨基酸。目前发现CYP2D6约有80个突变位点，基因突变可引起酶活性和数量的差异，从而导致药物代谢个体差异的产生。CYP2D6的代谢表型可分为超快代谢型(UMS)、快代谢型(EMS)、中等代谢型(IMs)、慢代谢型(PMs)。CYP2D6基因多态性会对药物的疗效产生影响，导致药物相互作用甚至毒副作用的产生。携带有CYP2D6代谢增强等位基因的患者，会更快速地代谢药物，使血药浓度下降过快而不能达到理想的治疗效果。携带有CYP2D6代谢能力减慢基因的患者，药物在体内的代谢速度减慢，从而使药物发生蓄积，发生毒性反应的概率变大。对于一些需要通过CYP2D6进行转化的前药，在缺乏CYP2D6基因的人群中会使药物的疗效降低。

研究发现止吐药药效与CYP2D6表型呈高度的相关性，如果是UM型患者服用5-HT3受体拮抗药，就会使药物血药浓度降低，影响昂丹司琼、托烷司琼等药物的疗效。因此，探讨CYP2D6的基因多态性，对指导临床合理用药和个体化用药具有重要的意义。临床药物基因组学实施联盟(CPIC)发布了CYP2D6基因型与昂丹司琼和托烷司琼的应用指南，5羟色胺3(5-HT3)受体拮抗剂主要用于预防放化疗相关以及术后恶心呕吐。CYP2D6多态性影响这些药物的代谢。针对CYP2D6基因型检测的临床应用提供相关信息进而指导5-HT3受体拮抗剂-昂丹司琼和托烷司琼的临床应用。

目前，对于基因多态性检测的方法主要有直接测序法、芯片法、高分辨率熔解曲线法、等位基因特异性扩增法、Taqman荧光探针法等。其中，测序法和芯片法，操作步骤繁琐，检测周期长，且扩增产物容易产生污染；高分辨率熔解曲线法步骤简单，特异性偏低，且对仪器设备的要求较高；等位基因特异性扩增法采用ARMS引物进行特异扩增，其引物设计难以最优化，检测条件要求严格。Taqman荧光探针法其试验成本高，对于多个基因的扩增通量不高。因此，需要建立一种简单、快速有效、价格低廉的检测基因多态性的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的用于昂丹司琼和托烷司琼代谢标志物的检测试剂盒的技术方案如下：