[发明专利]一种生物催化的高纯度NMN生产工艺在审
| 申请号： | 202111056346.X | 申请日： | 2021-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN113881738A | 公开（公告）日： | 2022-01-04 |
| 发明（设计）人： | 丰明乾;朱元奎;刘路 | 申请（专利权）人： | 武汉生命奥义生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30;C12N15/85;C12N15/54;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京盛凡佳华专利代理事务所(普通合伙) 11947 | 代理人： | 张晓东 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖新技术开发区光谷大道4*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物 催化 纯度 nmn 生产工艺 | ||
1.一种生物催化的高纯度NMN生产工艺，其特征在于：包括以烟酰胺核苷为底物，用含有烟酰胺核苷激酶全293F细胞，进行一步法高效制备β-烟酰胺单核苷酸，表达式为：
2.根据权利要求1所述的一种生物催化的高纯度NMN生产工艺，其特征在于：所述酶氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白质。
3.根据权利要求1所述的一种生物催化的高纯度NMN生产工艺，其特征在于：编码SEQID No.1所示的蛋白质的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体含有用于制备NMN的烟酰胺核苷激酶的基因。
5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞包含用于制备NMN的烟酰胺核苷激酶的基因的重组表达载体。
6.根据权利要求5所述的一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为293F细胞。
7.一种制备高纯度NMN的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、构建重组表达载体，
S2、利用重组表达载体转化宿主细胞，获得遗传工程化的宿主细胞，
S3、培养遗传工程化的宿主细胞，持续性表达烟酰胺核苷激酶，
S4、添加底物烟酰胺核苷，继续培养细胞，利用摇瓶法培养或发酵罐培养，
S5、离心收取上清，进行HPLC反应。
8.根据权利要求7所述的一种制备高纯度NMN的方法，其特征在于：所述步骤S3为将构建好的稳转烟酰胺核苷激酶全293F细胞，在摇瓶中使用无血清培养基进行培养，调整密度为5-6million/ml。
9.根据权利要求7所述的一种制备高纯度NMN的方法，其特征在于：所述步骤S4为在培养基中加入50mM烟酰胺核苷，在37℃下，摇动反应4h。
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