[发明专利]一种他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测他克莫司代谢标志物CYP3A5*3 6986AG的基因多态性，试剂盒针对CYP3A5*36986AG多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：样本处理液、磁珠、扩增试剂1、扩增试剂2、CYP3A5*3 6986AG测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述CYP3A5*3 6986AG扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述CYP3A5*3 6986AG测序引物如序列表SEQ ID NO:3所示。

4.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，CYP3A5*3 6986AG分配指令如序列表SEQ ID NO:5所示。

5.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述样本处理液包括0.1％-0.6％十二烷基硫酸锂、0.1-0.5％曲拉通X-100、2-50mg/mL氢氧化钠、5-15％海藻糖、3～7mmol/L BSA、20-80mM Tris-HCl、100mM NaCl，PH＝8.5-9.5。

6.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠为羧基磁珠，反应液中磁珠浓度为0.2mg/25μL。

7.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂1包括：扩增缓冲液和15mM醋酸镁。

8.根据权利要求1所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂2包括：CYP3A5*3 6986AG前引物0.32uM，CYP3A5*3 6986AG后引物0.32uM，dNTPS 0.3mM、链置换DNA聚合酶1.2ng/μL，单链DNA结合蛋白3.2ng/μL，结合单链核酸的重组酶4.8ng/μL。

9.一种采用根据权利要求1～8任一项所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a.样本处理液100ul、4ul磁珠和30ulEDTA抗凝全血样本混合，室温静置5min；

b.将所述PCR扩增管放置在磁力架上，待磁珠全部吸附至一侧后从磁珠对侧将混合液吸出；

c.将配制好的PCR反应液加入到步骤b)得到的PCR扩增管中，使磁珠与所述PCR反应液充分混匀，离心，进行恒温反应；

d.将含微珠的结合液与扩增产物进行结合；

e.变性液处理得到单链产物；

f.加入洗涤缓冲液漂洗；

g.向每个测序管中加入测序酶和测序底物；

h.取一个8排管，自圆滑一端向平端依次加入dATP、dTTP、dGTP、dCTP、CYP3A5*36986AG测序引物；

i.焦磷酸测序。

10.一种根据权利要求1～9任一项所述的他克莫司代谢标志物的基因多态性检测试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述检测试剂盒用于对CYP3A5*3 6986AG进行检测。