[发明专利]一种细胞高活性染色方法

说明书

本发明实施例提供了一种细胞高活性染色方法，所述方法包括：将包含目标细胞的样本和特异性的直标抗体混合；通过电极对样本中的目标细胞进行电穿孔标记，在电穿孔过程中，特异性的直标抗体进入目标细胞，完成特异性标记；对完成特异性标记的目标细胞进行静置，以使目标细胞的细胞膜复原。在本发明中，利用电穿孔方法将特异性的直标抗体导入目标细胞的过程中，不会对细胞造成不可逆的破坏，在完成电穿孔操作之后，目标细胞的细胞膜在10分钟内即可复原，恢复高活性且标记特异性接近100％。

技术领域

本发明涉及生物/医学鉴定领域，具体涉及一种细胞高活性染色方法。

背景技术

免疫荧光染色是以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术，常应用于目标细胞的检出和鉴别。

通常采用的免疫荧光染色技术中，为了提高染色效率，一般需要固定、破膜、封闭、抗体孵育等一系列步骤。其中固定的目的是终止细胞内酶的活动及其他代谢活动，破膜是破坏细胞膜结构，暴露膜内抗原蛋白位点，保证抗原抗体有机会结合。上述步骤均为不可逆破坏，因此经过免疫荧光染色的细胞一般活性极低，无法实现下游细胞分析，如活细胞杨氏模量测量、增殖特性分析、转移特性分析等。此外，在传统的免疫荧光染色技术中整个实验需要耗时2小时以上(甚至过夜孵育)，无法快速完成细胞染色。

总之，现有方法无法快速实现目标细胞的高特异性、高活性特异性标记。因此，目前亟需一种可以实现快速、高活性的目标细胞染色的方案。

发明内容

本发明涉及一种细胞高活性快速染色方法，该方法在保证高特异性细胞标记的同时可以保证细胞活性不受影响，该方法所需时间较短，染色效率远优于目前的染色方法。

为了解决上述问题，本发明实施例提供了一种细胞高活性染色方法，所述方法包括：

将含有目标细胞的样本和特异性的直标抗体混合；

通过电极对所述样本中目标细胞进行电穿孔标记，在标记过程中，所述特异性的直标抗体进入所述目标细胞，实现所述目标细胞的特异性标记；

对完成特异性标记的目标细胞进行静置处理，以使所述目标细胞的细胞膜复原。

可选地，在将包含目标细胞的样本和特异性的直标抗体混合之前，所述方法还包括：

对液基样本进行预处理，分离得到所述液基样本中的所述目标细胞。

可选地，所述对液基样本进行预处理，分离得到所述液基样本中的所述目标细胞，包括：

利用高孔隙多孔滤膜对所述液基样本进行过滤，将所述目标细胞分离、富集在所述高孔隙多孔滤膜之上。

可选地，所述高孔隙多孔滤膜的材料为聚对二甲苯，所述高孔隙多孔滤膜整体的大小范围为1mm²～400mm²；所述高孔隙多孔滤膜的膜孔为六边形膜孔，所述高孔隙多孔滤膜的模孔直径范围是2μm～100μm，孔间距小于10μm。

可选地，所述通过电极对所述目标细胞进行电穿孔标记，包括：将所述高孔隙多孔滤膜置于电极对之间，所述电极对连接一外部电脉冲发生器，所述电脉冲发生器向所述电极对施加电脉冲，以对所述目标细胞进行电穿孔标记。

可选地，所述特异性的直标抗体与传统免疫荧光染色所用抗体一致，用于特异性标记所述目标细胞。

可选地，对完成特异性标记的目标细胞进行静置处理之后，所述方法还包括：

对完成特异性标记的目标细胞进行原位培养，以对所述目标细胞进行下游分析。

本发明提出的一种细胞高活性染色方法，利用电穿孔方法将特异性的直标抗体导入目标细胞的过程中，不会对细胞造成不可逆的破坏，在完成电穿孔操作之后，目标细胞的细胞膜在10分钟以内可以快速复原，恢复高活性。