[发明专利]一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法以及应用

权利要求书

1.一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取出鱼体的内脏团，摘除胆囊器官；

S2、将内脏团样品用无水乙醇进行快速脱水处理，沥干样品；快速脱水处理的时间为10~25min；

S3、将脱水后的样品用油红O染液进行染色处理，沥干样品；染色处理的时间为6~12min；

S4、用无水乙醇漂洗去除样品表面残留的染液，沥干样品；漂洗时间为30s；

S5、将S4的样品放入盛有无水乙醇溶液的密封容器中，进行静置萃取；对获得的萃取液进行离心，收集上清液；静置萃取的时间为28~36h；

S6、在波长510nm处测定S5上清液的吸光度OD值；取各梯度质量分数的油红O工作液置于酶标板，在波长510nm处测定吸光度，以油红O质量分数为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制油红O标准曲线；

S7、将S6的吸光度OD值与油红O标准曲线的吸光度OD值进行比对，获得萃取液的油红O质量分数，再根据计算公式获得个体肠系膜脂肪沉积量；

所述S7的计算公式具体如下：

计算公式为：w_o = ω × w_e，式中w_o为样品萃取出的油红O质量，ω为利用标准曲线计算出的样品萃取液油红O的质量分数，w_e为萃取所用无水乙醇的质量；鱼体肠系膜脂肪沉积量= w_o。

2.如权利要求1所述的定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法，其特征在于，所述内脏团不包含鱼鳔、性腺器官。

3.如权利要求1所述的定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法在比较鱼个体间肠系膜脂肪沉积差异中的应用。

4.一种比较鱼类肠系膜脂肪沉积量差异的定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取出各鱼体的内脏团，摘除胆囊器官；

S2、将PIT 电子芯片标记分别塞入各内脏团样品的肠道内；

S3、将S2的内脏团样品放入浓度为4%的多聚甲醛溶液中浸泡，获得内脏团固定样品；所述S3染色处理的时间为6~12min；

S4、将内脏团固定样品用无水乙醇进行快速脱水处理，沥干样品；所述S4快速脱水处理的时间为10~25min；

S5、将脱水后的样品用油红O染液进行集中染色处理，沥干样品；

S6、用无水乙醇漂洗去除样品表面残留的染液，沥干样品；所述S6漂洗时间为30s；

S7、将S6的各个样品分别放入盛有相同质量的无水乙醇溶液的密封容器中，进行静置萃取；对获得的萃取液进行离心，收集上清液；所述S7静置萃取的时间为28~36h；

S8、在波长510nm处测定S7上清液的吸光度OD值；取各梯度质量分数的油红O工作液置于酶标板，在波长510nm处测定吸光度，以油红O质量分数为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制油红O标准曲线；

S9、将S8的吸光度OD值与油红O标准曲线的吸光度OD值进行比对，获得萃取液的油红O质量分数，再根据计算公式获得各内脏团样品的肠系膜脂肪沉积量；

S10、将各内脏团样品的肠系膜脂肪沉积量进行比较，获得各鱼体肠系膜脂肪沉积量差异结果；

所述S9的计算公式具体如下：

计算公式为：w_o = ω × w_e，式中w_o为样品萃取出的油红O质量，ω为利用标准曲线计算出的样品萃取液油红O的质量分数，w_e为萃取所用无水乙醇的质量；鱼体肠系膜脂肪沉积量=w_o。

5.如权利要求4所述的定量分析方法，其特征在于，所述S4快速脱水处理的时间以样品的脱水率为衡量指标，脱水率为50%~95%；所述S4快速脱水处理的时间为15min。

6.如权利要求4所述的定量分析方法，其特征在于，所述S5染色处理的时间以肉眼可见的脂肪组织被充分染为红色，肠道、肝胰脏、脾脏其他脏器未被染色或影响轻微为准；所述S5染色处理的时间为9min。

7.如权利要求4所述的定量分析方法，其特征在于，所述S7静置萃取的时间是以样品中肉眼观测染样脂肪组织内的红色染料完全褪去，组织恢复原色为准；所述S7静置萃取的时间为28h。