[发明专利]一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法以及应用

说明书

本发明提供一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法以及应用。本发明基于脂溶性染料油红O可特异性着色脂肪组织的特性，开发出一种精确、便捷定量鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法。采用染色‑萃取技术方案，避免传统解剖刀刮取脂肪组织直接称量方法的量化粗糙、误差大、操作不便利等问题，通过内脏团样品采集处理、样品标记、固定、脱水、定染、漂洗、萃取和定量等操作步骤，获得个体肠系膜脂肪的沉积量，是以样品吸附并萃取出的油红O质量来表示，可用于精准比较鱼个体间肠系膜脂肪沉积的差异。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法以及应用。

背景技术

近年来，随着高产高效集约化模式的推广应用，养殖鱼类长速加快，上市周期缩短，但也常出现体脂过度沉积现象，导致鱼体自身健康状况及食用品质下降等问题。其中腹腔内的肠系膜脂肪组织，作为多数鱼类贮存能量，蓄积脂肪的主要功能部位，过度沉积不仅造成饲料资源的浪费，也直接加剧肥胖体型，影响鲜活产品的销售。

针对上述产业问题，科研人员尝试从营养与饲料、遗传育种等多方面开展调控机理与应用技术研究。在研发过程中，通常涉及鱼体肠系膜脂肪沉积量的测定与比较，用以量化评价调控方案的实施效果及优化技术参数。然而，多数鱼类腹腔内的脂肪组织紧随肠管附着延伸，而鱼肠道细长，盘旋回折多，导致该性状无法直接计量。传统解决方法是利用解剖刀等工具将粘连在肠壁周围的脂肪组织进行人工刮取剖离，再集中称量分析。该方法虽然简单直接，但在实际刮取时，易发生肠管破裂，使得肠道内容物混杂其中而造成数据出现较大误差。尤其当处理样品数量较多或实验鱼规格较小时，该方法存在耗时费力，操作失误率高，不易统一规范操作等问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明拟利用油红O作为脂溶性染料，可特异性着色脂肪的特性，开发出了一种可精确定量鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法，操作简单，无需刮取鱼体腹腔内的脂肪组织。

本发明采用以下技术方案实现本发明的目的：

第一个方面，本发明提供一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法，包括以下步骤：

S1、取出鱼体的内脏团，摘除胆囊器官；

S2、将内脏团样品用无水乙醇进行快速脱水处理，沥干样品；

S3、将脱水后的样品用油红O染液进行染色处理，沥干样品；

S4、用无水乙醇漂洗去除样品表面残留的染液，沥干样品；

S5、将S4的样品放入盛有无水乙醇溶液的密封容器中，进行静置萃取；对获得的萃取液进行离心，收集上清液；

S6、在波长510nm处测定S5上清液的吸光度OD值；

S7、将S6的吸光度OD值与油红O标准曲线的吸光度OD值进行比对，获得萃取液的油红O质量分数，再根据计算公式获得个体肠系膜脂肪沉积量。

本发明整个构思以油红O特异性染色脂肪组织的特性，与有机溶剂萃取的机制，将染色与萃取相结合，通过有机溶剂萃取吸附有油红O染料的样品组织，并以萃取出的油红O质量来表示鱼体肠系膜脂肪的沉积量，用于精准定量鱼体肠系膜脂肪沉积量。本发明之所以选择无水乙醇作为脱水、染色、萃取过程的溶剂，主要是因为乙醇与油红O具有良好的相溶性，其次是乙醇相比其他醇类易于获得，价格低廉、低毒性、刺鼻气味轻微。在本发明中需要摘除鱼的胆囊器官，是因为胆囊内储存的有色胆汁，一旦发生破裂可能干扰样品染色、吸光度检测的精准度。

本发明的内脏团具体指：剖开鱼腹，以腹腔内消化道为采集对象，剪断消化道前端(前肠顶部)和后端(后肠肛门处)，用镊子取出整个消化道以及与其紧密粘连的肝胰脏、胆囊、脾脏器官和肠系膜脂肪组织，不含鱼鳔和性腺。摘除胆囊后，从而获得初始内脏团样品。