[发明专利]一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒

权利要求书

1.ITGB6在胃癌肿瘤标记物检测中的应用。

2.一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括酶标板、兔抗ITGB6血清抗体、酶标羊抗ITGB6血清抗体、洗涤液、PBST封闭液、TMB底物显色试剂、反应终止液。

3.根据权利要求2所述的胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述兔抗ITGB6血清抗体和酶标羊抗ITGB6血清抗体的浓度均为2ug/ml。

4.根据权利要求2所述的胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含有质量浓度0.05％Tween20的PBS，PH值为7.5。

5.根据权利要求2所述的胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述PBST封闭液中含有质量浓度为3％的BSA。

6.根据权利要求2所述的胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶为HRP。

7.根据权利要求2所述的胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述TMB底物显色试剂包括分装的TMB底物溶液和过氧化氢。

8.根据权利要求2所述的胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为H₂SO₄，浓度为2mol/L。

9.一种如权利要求2所述的试剂盒在胃癌检测、评估肿瘤恶性程度及受试者预后中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将兔抗ITGB6血清抗体包被酶标板，洗涤液洗涤酶标板2-5次，然后用封闭液封闭，封闭液的用量为200ul/孔，在37℃下操作；再用洗涤液洗涤酶标板2-5次；

(2)取受试者血液样品，用纯净水稀释1000倍，取稀释液加入包被好的酶标板中，稀释液用量为150ul/孔，在37℃下孵育2-4h后，用洗涤液洗涤酶标板洗板2-5次；

(3)加入酶标羊抗ITGB6血清抗体溶液，100ul/孔，在37℃下孵育1-2h；用洗涤液洗涤酶标板洗板2-5次，拍干；

(4)将TMB底物显色试剂加入酶标板中，100ul/孔，反应3-8min；再用反应终止液终止反应，观察每孔颜色；

(5)判定：基本颜色为无色判定为阴性，颜色呈黄色则判定为阳性；经过标准曲线测定及X-tile验证，ITGB60.5ng/ml定义为高表达。