[发明专利]一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了ITGB6在胃癌肿瘤标记物检测中的应用，并公开了一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括酶标板、兔抗ITGB6血清抗体、酶标羊抗ITGB6血清抗体、洗涤液、PBST封闭液、TMB底物显色试剂、反应终止液；同时公开了该试剂盒在胃癌检测、评估肿瘤恶性程度及受试者预后中的应用及具体应用方法。本发明首次将ITGB6的血清表达水平与胃癌的发生发展相联系，通过检测受试者血液中ITGB6的表达量，结合CEA水平测定，判断受试者是否患有胃癌，并预测受试者胃癌恶性程度及预后情况，从而指导临床医师给受试者提供治疗方案。本发明的方法更具有敏感性、特异性和无创性。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒。

背景技术

胃癌是消化道常见肿瘤，其死亡率在所有癌症中高居第二。胃癌疾病负担严重，胃癌的防治就显得非常重要。胃癌的早发现早治疗对受试者预后及生存率至关重要。但目前胃癌的诊断主要依赖于内镜下活检，并不适用于大规模筛查。此外，早期筛查常用的一些肿瘤标记物检查特异性较低，比如目前最常用的传统瘤标癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)，它的升高也可能与直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌等相关，甚至是一些良性疾病。可以说目前尚缺乏灵敏度和特异度均满意的用于胃癌诊治相关的生物标记物。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，能够提示胃癌的恶性程度，并能有效预测受试者预后，在临床可联合影像学、病理学来提高胃癌恶性程度的评估效率及准确度，对胃癌的早发现早治疗具有重要意义。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

ITGB6在胃癌肿瘤标记物检测中的应用。

一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括酶标板、兔抗ITGB6血清抗体、酶标羊抗ITGB6血清抗体、洗涤液、PBST封闭液、TMB底物显色试剂、反应终止液。

上述方案中，所述兔抗ITGB6血清抗体和酶标羊抗ITGB6血清抗体的浓度均为2ug/ml。

上述方案中，所述洗涤液为含有质量浓度0.05％Tween20的PBS，PH值为7.5。

上述方案中，所述PBST封闭液中含有质量浓度为3％的BSA。

上述方案中，所述酶为HRP。

上述方案中，所述TMB底物显色试剂包括分装的TMB底物溶液和过氧化氢。

上述方案中，所述反应终止液为H₂SO₄，浓度为2mol/L。

一种胃癌肿瘤标记物检测的ELISA试剂盒在胃癌检测、评估肿瘤恶性程度及受试者预后中的应用。

上述方案中，试剂盒的应用包括如下步骤：

(1)将兔抗ITGB6血清抗体包被酶标板，洗涤液洗涤酶标板2-5次，然后用封闭液封闭，封闭液的用量为200ul/孔，在37℃下操作；再用洗涤液洗涤酶标板2-5次；

(2)取受试者血液样品，用纯净水稀释1000倍，取稀释液加入包被好的酶标板中，稀释液用量为150ul/孔，在37℃下孵育2-4h后，用洗涤液洗涤酶标板洗板2-5次；

(3)加入酶标羊抗ITGB6血清抗体溶液，100ul/孔，在37℃下孵育1-2h；用洗涤液洗涤酶标板洗板2-5次，拍干；

(4)将TMB底物显色试剂加入酶标板中，100ul/孔，反应3-8min；再用反应终止液终止反应，观察每孔颜色；