[发明专利]一种联合检测EGFR基因突变的试剂和试剂盒

说明书

本发明提供了联合检测EGFR基因突变的试剂和试剂盒，涉及生物技术领域。本发明所述试剂盒采用ARMS技术与Tagman探针相结合的方法，可解决市面上试剂盒不能检测C797S和T790M顺反式突变问题。本发明所述试剂盒，基于荧光PCR技术平台，检测范围广、灵敏度和准确度高，可同时检测包括19号外显子缺失，20号外显子插入突变，21号外显子L858R替代突变，T790M耐药突变以及L861Q，G719X，S768I，C797S等罕见突变的检测。利用本发明所述试剂盒进行检测时，检测速度快，判读简单，检测费用低。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种联合检测EGFR基因突变的试剂和试剂盒。

背景技术

靶向治疗是随着肿瘤基因分子生物学的研究而出现的，通过基因研究，医学界最终确认肿瘤是由于人体内发生突变的细胞导致的。肿瘤相关的基因主要包含：癌基因、肿瘤抑制基因、肿瘤耐药基因以及与肿瘤转移相关的基因等。靶向治疗是指在细胞分子水平上，通过基因检测，设计出相应的治疗药物，药物进入身体后识别靶点，识别后直接作用于目标器官上，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围的正常组织。靶向药物不是对所有的肿瘤患者都有疗效，临床结果显示：不经筛选而使用靶向药物，平均有效率仅为30～40％。因此在服用靶向药物前，需进行基因检测来进行靶向药物筛选。常用的基因检测方法有测序法和PCR法等，通过现代科技手段找出癌症的突变基因，针对特定基因突变，选择相应的对症药物，特异的阻断突变信号，杀死癌细胞，提升治疗效果，实施精准、合理的个体化治疗。很多靶向药物已经在临床起了极其重要的作用，正是由于靶向治疗的涌现使很多乳腺癌、肺癌、大肠癌、肾癌和胃肠间质瘤等患者生存获益，而更重要的是在一定程度上实现了肿瘤诊疗的“个体化”。随着越来越多的靶向药物按照循证医学的原则进入国际肿瘤学界公认的标准治疗方案和规则，通过精准的基因检测从而进行更精确的肿瘤用药指导已经成为临床上分子靶向治疗不可或缺的一部分。

目前肺癌治疗的方法主要为外科疗法、放射疗法、药物疗法，免疫疗法和靶向治疗，且个体化靶向治疗已经成为非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的一个趋势，由于并不是所有的患者利用EGFR靶向药都能得到很好的疗效，仅有EGFR基因敏感性增强的突变患者能够受益，为了减轻患者的负担，预测EGFR靶向药的疗效，对EGFR基因的突变情况必须要有一个了解。

EGFR基因位于人七号染色体(7p12)，碱基长度约118kb，含有28个外显子，分子量为170kD，具有酪氨酸激酶活性，主要作用是将细胞外的信号传导进入细胞内。EGFR基因突变主要发生在外显子18、外显子19、外显子20以及外显子21上，其中以19号外显子的缺失突变和21号外显子的L858R点突变最为常见，这两个突变能导致EGFR蛋白的活化，促进肿瘤细胞的增殖、迁移、分化、血管新生，并且能够抑制肿瘤细胞的死亡。不止在非小细胞肺癌中，其他癌症中也普遍存在EGFR基因突变。

Tagman探针法由于其具有很高的灵敏性和特异性，因此是近几年来研究EGFR基因突变最热门的方法。ARMS PCR是目前公认的检测EGFR基因突变最为敏感的方法之一，其检测灵敏度高达10copies，敏感性高达1％，此外其具有操作简便、判读容易、省时、检测突变种类多等优点，但价格相对昂贵，且不能检测EGFR基因C797S和T790M顺反式突变。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种联合检测EGFR基因突变的试剂和试剂盒，能够检测常见突变位点以及C797S和T790M顺反式突变，并且快速、敏感、特异、简便，价格低廉。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种联合检测EGFR基因突变的试剂，所述试剂包括根据EGFR基因突变位点设计的特异性引物对；

所述EGFR基因突变位点包括：T790M、L858R、19号外显子缺失、G719X、20号外显子插入、S768I、L861Q、C797S和C797S-T790M。