[发明专利]一种甘蔗茎尖培养的改良方法

说明书

本发明公开了一种甘蔗茎尖培养的改良方法，属于农业生产技术领域。所述改良方法包括以下步骤：选取甘蔗尾梢的茎尖为外植体，在40‑45℃无菌水热激处理，之后接种改良MS培养基中，培养至长出新的侧芽；其中，培养期间，自接种第5天开始每天进行冷刺激1‑3次，持续10‑18天；所述改良MS培养基包括以下组分：MS+0.05‑0.15mg/L噻苯隆+0.1‑0.25mg/L6‑BA+蔗糖20‑30g/L。本发明公开的培养甘蔗茎尖的改良方法，实现茎尖成活率最高达86.35％，缩短培养周期，满足市场对于大量甘蔗无性繁殖材料的需求。

技术领域

本发明涉及农业生产技术领域，特别是涉及一种甘蔗茎尖培养的改良方法。

背景技术

甘蔗是禾本科甘蔗属植物，原产于热带、亚热带地区。甘蔗中含有丰富的糖分、水分，还含有对人体新陈代谢非常有益的各种维生素、脂肪、蛋白质、有机酸、钙、铁等物质，主要用于制糖，每年市场需求量都比较大。而甘蔗属无性系繁殖作物，利用自身的蔗茎作为种源繁殖，连续种植多年后容易感染或者积累病菌，这也严重制约了甘蔗组培苗的周年规模化生产。另外，目前通过热处理结合茎尖分生组织培养是现在生产上培养甘蔗脱毒健康种苗的一个主要的技术。研究结果表明，该技术确实可以去除如蔗株上的花叶病、宿根矮化病等，并且很多国家也已经利用此技术建立工厂化生产脱毒苗。但是，此技术虽然已应用较广泛，但是仍然存在酚污染严重、成活率低等问题，这严重影响了甘蔗脱毒苗的市场供应量和供应速度。

发明内容

本发明的目的是提供一种甘蔗茎尖培养的改良方法，以解决上述现有技术存在的问题，可以明显减少酚污染，提高甘蔗茎尖培养成活率。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种甘蔗茎尖培养的改良方法，包括以下步骤：

选取甘蔗尾梢的茎尖为外植体，在40-45℃热激处理之后，接种于改良MS培养基中，培养至长出新的侧芽；

其中，培养期间，自接种第5天开始每天进行冷刺激1-3次，持续10-18天；所述改良MS培养基包括以下组分：MS+0.05-0.15mg/L噻苯隆+0.1-0.25mg/L 6-BA+蔗糖20-30g/L。

优选的是，热激处理之前，先剥去尾梢外层叶鞘，露出生长点，并切取生长点下2-3mm的叶原基，然后用75％酒精浸泡25-30s，再用清水冲洗3-5次。

优选的是，所述甘蔗茎尖在40-45℃无菌水中热激2-3min。

优选的是，培养期间冷刺激的方式具体为：自接种第5天开始每天冷刺激3次，之后每间隔5天每天冷刺激次数减少1次，直至减少到每天冷刺激1次，并持续5天。

优选的是，每天冷刺激的时间为：每天的5点和/或9点和/或21点；

冷刺激温度为0-4℃，每次冷刺激持续20-30s。

优选的是，还包括培养所述甘蔗茎尖的专用培养装置；

其中，所述专用培养装置包括：培养瓶和悬置于所述培养瓶的茎尖承载装置；

所述培养瓶为具有开口的瓶体；

所述茎尖承载装置包括第一承载部、第二承载部以及钩体，所述第一承载部和所述第二承载部均为一端开口的网状筒体结构，所述第一承载部的开口外侧设置外螺纹，所述第二承载部的开口内侧设置内螺纹，所述第一承载部和所述第二承载部通过所述内螺纹和所述外螺纹可拆卸连接；所述第一承接部未开口端与所述钩体的一端固定连接，所述钩体的另一端悬挂在所述培养瓶的开口处。

优选的是，利用所述专用培养装置培养所述甘蔗茎尖的方法包括以下步骤：