[发明专利]北柴胡非皂苷类成分HPLC指纹图谱的构建方法及应用

说明书

本发明公开了一种北柴胡非皂苷类成分HPLC指纹图谱的构建方法及应用，步骤包括：1）供试品溶液的制备；2）对照品溶液的制备；3）建立色谱条件；4）测定：精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，在高效液相色谱条件下进行梯度洗脱，得到HPLC指纹图谱；5）数据分析：对不同种植方式、不同产地的北柴胡进行比较分析，找出可以鉴别不同种植方式、不同产地的北柴胡的标志峰。并结合ROC曲线对特征成分进行预测，利用该方法建立的北柴胡指纹图谱能够较全面的反映北柴胡中的皂苷、黄酮、多炔类等主要化学成分信息，有效监控不同品种、不同产地、不同种植方式北柴胡的质量，本方法精密度高、重现性好，可用于北柴胡的质量控制。

技术领域

本发明涉及一种北柴胡非皂苷类成分HPLC指纹图谱的构建方法及应用，属于中药制剂的质量控制领域。

背景技术

北柴胡作为一种常见中草药，在疏肝解郁、解表退热等方面有良好的治疗效果，在临床上使用广泛，它内在品质的优劣影响着处方的疗效。近些年来野生北柴胡的资源日渐匮乏，眼下迫切需要找出一种可以代替野生北柴胡入药的药材，由人工栽培出来的北柴胡可以弥补野生北柴胡数量减少带来的市场缺口，但人工栽培的北柴胡有效成分的含量因受到产地、栽培技术等方面的影响而相差很大，使得市场上销售的北柴胡质量参差不齐。这提示我们应重点关注北柴胡的产地和品种引起的北柴胡内在品质的差异问题。山西省的柴胡种植面积位居全国第二，北柴胡是主要的种植品种。

通过比较山西种植北柴胡与不同种植方式、其它不同产地北柴胡的品质，确立优质产区，对提升北柴胡商品的内在品质，从而对维护临床用药的安全和有效十分必要。故可利用高效液相色谱建立北柴胡的指纹图谱，来全面反映不同种植方式、不同产地北柴胡的差异成分，为晋产北柴胡质量评价提供依据。目前对北柴胡指纹图谱研究的成分较为单一，均为同一类化合物，本发明建立了一种可以同时测定北柴胡中皂苷、黄酮、多炔类等主要化学成分的指纹图谱。

发明内容

本发明旨在提供一种北柴胡非皂苷类成分HPLC指纹图谱的构建方法，可以同时测定柴胡中皂苷、黄酮、多炔类、有机酸等化学成分；该图谱能够全面反映北柴胡中小分子化合物的特征，并找出不同种植方式、不同产地北柴胡的特征成分，具有方法简单、操作方便、耗时短的优势。

本发明提供了一种北柴胡非皂苷类成分HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：柴胡皂苷b2制备得对照品甲醇溶液：精密称取柴胡皂苷b2对照品适量，加甲醇制成质量浓度为0.1-0.7g·L^-1的对照品溶液，4℃保存备用。

（2）北柴胡供试品溶液的制备：取0.2-5.0g柴胡细粉精密称定，放入锥形瓶中，精密量取甲醇5-50 mL，加入锥形瓶中，用封口膜密封，并对它进行称重，超声处理30 -60min，在室温中放冷后，再次称重，补足失重，取上清液在高速冷冻离心机中再室温下以8000r/min离心10分钟，取上清液，过 0.22 μm微孔滤膜，既得供试品溶液；

（3）色谱检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，柱温为20-40 ℃，流速为0.6-1.5ml/min，检测波长为210-280 nm，流动相为0.03-0.3%（体积百分比）甲酸乙腈和0.03-0.3%甲酸水条件下梯度洗脱；

（4）测定：精密吸取对照品及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，得到指纹图谱。

优选地，所述梯度洗脱条件为：

0~30min，0.1%甲酸乙腈：0.1%甲酸水体积比由10%﹕90%到40%﹕60%；

30~55min，0.1%甲酸乙腈：0.1%甲酸水体积为40%﹕60%到75%﹕25%；

55~67min，0.1%甲酸乙腈：0.1%甲酸水体积比由75%﹕25%到95%﹕5%；

67~70min，0.1%甲酸乙腈：0.1%甲酸水体积比为95%﹕5%到95%﹕5%。