[发明专利]一种草甘膦快速间接检测方法

说明书

本发明公开了一种草甘膦快速间接检测方法，其方法为：步骤一、样品中草甘膦残留的提取液的制备；步骤二、提取液的净化；步骤三、茚三酮工作液的配制；步骤四、提取液的衍生；步骤五、Ag NPs的制备；步骤六、衍生液的测定；步骤七、草甘膦含量的计算；有益效果：反应条件温和易于控制，衍生过程简单，所需设备少，步骤简单，易于操作等优点；用量少，方法灵敏度高，快速简单，具有较高的实际应用和推广价值；选用茚三酮作为显色剂、Ag NPs作为光谱增强试剂，具有提高灵敏度，降低检出限的优点。

技术领域

本发明属于农药快速检测技术领域，特别涉及一种草甘膦快速间接检测方法。

背景技术

目前，草甘膦(Glyphosate)是全球生产和使用量最大、使用时间最长的除草剂品种，约占据全球除草剂30％的市场份额，广泛用于农田各种杂草的除防。随着抗草甘膦作物的培育成功，草甘膦的用量逐年递增。文献报道草甘膦具有广泛的生殖毒性、诱突变性等一些环境激素效应，可以通过环境中的水体、土壤等进入到食品中，对人体健康构成危害。草甘膦被世界卫生组织旗下的国际癌症研究机构列入2A类致癌物清单，是很可能致癌的物质。因此，在国内外环境、食品、土壤等领域农药残留检测中，草甘膦残留分析是重要的检测内容。

草甘膦现有的检测方法主要分为直接检测方法和间接检测方法两大类。其中，直接检测方法主要是离子色谱法，采用离子色谱法不需要对草甘膦进行衍生化，但是对仪器条件要求较高，检测成本昂贵，没有得到普遍的推广。草甘膦的间接检测方法包括仪器分析方法和快速检测方法。其中间接检测的仪器分析方法包括气相色谱及其与质谱(GC-MS)联用技术、液相色谱及其与质谱(LC-MS)联用技术。在GC-MS法中，草甘膦分子溶于水，且具有极性大、不易挥发的特点，样品需要在-40℃至-60℃与三氟乙酸酐、七氟丁醇混合物混合冷却，并在90℃的条件下衍生，通过分析衍生物的含量间接获得草甘膦的含量。在LC-MS法中，由于草甘膦化合物结构中无特征的吸收峰不具有可以被荧光检测的官能团，同样需要采取柱前与9-芴基甲基三氯甲烷过夜衍生，通过分析衍生物的含量间接获得草甘膦的含量。但存在衍生化过程繁琐、耗时且柱后生成物不稳定，衍生试剂对人体有害的问题。草甘膦间接检测的快速分析方法包括多孔过氧化物酶活性抑制法、草甘膦受体识别法等。其中，多孔过氧化物酶活性抑制法基于草甘膦对Co₃O₄作为H₂O₂水解酶活性的抑制作用，当草甘膦存在时，H₂O₂不能水解，作为显色剂的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺不能被氧化为蓝色，通过颜色间接判断草甘膦的含量。草甘膦受体识别法通过草甘膦受体蛋白质与草甘膦识别，并标记上荧光蛋白显色的方法，实现对草甘膦的间接检测。

以上各种检测方法中直接检测方法存在仪器设备昂贵、对人员专业技术要求高、检测成本高等问题；间接检测方法中，仪器分析方法存在前期处理复杂、衍生化条件苛刻等问题，快速检测方法中存在灵敏度不高、受体蛋白制备困难等问题。因此，建立更加简便、快速、准确、经济的新的检测方法成为草甘膦检测迫切需要解决的重要问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的草甘膦检测方法中仪器分析方法普遍存在的设备昂贵、前期处理复杂、衍生化条件苛刻、对人员专业技术要求高，以及快速检测方法中不够灵敏、检测成本高等问题，而提供的一种草甘膦快速间接检测方法。

本发明提供的草甘膦快速间接检测方法，其方法如下所述：

步骤一、样品中草甘膦残留的提取液的制备：采用溶剂浸提、超声提取草甘膦残留，离心获得上清液备用，针对不同液体样品，采用正己烷或二氯甲烷有机溶剂去除有机物，离心获得上清液作为提取液备用。

样品提取液的制备至关重要，针对不同的样品基质，需要采用不同的方法去除影响检测结果的蛋白质、油脂等。针对土壤样品，利用磷酸钠和柠檬酸钠去除有机物；针对食品样品，利用二氯甲烷去除有机物。