[发明专利]一种蛋白质赖氨酸位点的修饰方法及其应用

权利要求书

1.一种蛋白质赖氨酸位点的修饰方法，其特征在于步骤如下：蛋白和探针于PBS中混匀，于37℃水浴中反应后，加入聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液混匀，沸水加热8-10分钟后进行分离；

其中，探针为锍盐活性酯探针2、锍盐活性酯荧光探针4或锍盐活性酯探针5中的一种，结构式分别如下：

其中，当探针为锍盐活性酯探针5时，探针与蛋白的摩尔比为1：10，pH为7.4，在37℃下反应12小时，反应后通过分子筛在快速蛋白质液相色谱上纯化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，分离后通过考马斯亮蓝染色进行染色鉴定。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，分离后通过免疫印迹实验检测对应蛋白的含量。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述锍盐活性酯探针2的制备方法为：将生物素溶解在甲醇中，加入摩尔比1：2的二甲基(丙-2-炔-1-基)锍盐和N，N-二甲基甲酰胺，在37℃下反应6小时，减压浓缩，通过HPLC纯化和分离，反应式如下：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述锍盐活性酯荧光探针4的制备方法为：将荧光染料磺基青色素5溶解在甲醇中，加入摩尔比1：2的二甲基(丙-2-炔-1-基)锍盐和N，N-二甲基甲酰胺，在37℃下反应6小时，减压浓缩，通过HPLC纯化和分离。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，锍盐活性酯探针5的制备步骤如下：选择细胞毒性药物一甲基澳瑞他汀E作为细胞毒药，将一甲基澳瑞他汀E的非活性末端进行修饰，形成末端羧基的结构，与二甲基的炔丙基硫盐反应，HPLC分离纯化后得到锍盐活性酯探针5。