[发明专利]基于液相色谱-质谱检测血清中特瑞普利单抗的方法

权利要求书

1.基于液相色谱-质谱检测血清中特瑞普利单抗的方法，其特征在于，使用同位素标记的单克隆抗体作为内标，先采用琼脂糖基质磁性微球富集人血清样品中的特瑞普利单克隆抗体，再酶解富集后的单克隆抗体以获得特征性肽段，最后使用液相色谱-质谱检测平台通过内标法定量特征性肽段从而准确定量人血清中特瑞普利单克隆抗体的含量。

2.根据权利要求1所述的基于液相色谱-质谱检测血清中特瑞普利单抗的方法，其特征在于，其包括以下详细步骤：

步骤S1，配制系列浓度的校准品溶液、质控品溶液和内标工作液；

步骤S2，按校准品溶液、质控品溶液、空白血清和待测样本的总数量分别取磁珠悬浮液并使用磷酸缓冲盐溶液清洗，并去掉清洗液；

步骤S3，分别向对应的磁珠中添加空白血清、系列浓度的校准品溶液、质控品溶液及待测样本，再加入内标工作液和磷酸缓冲盐溶液，室温孵育25-35min，孵育完成后使用磷酸缓冲盐溶液清洗孵育完的磁珠，去掉清洗液并分别收集磁珠；

步骤S4，往步骤S3中收集到的磁珠中加入碳酸氢铵溶液，95℃，反应5.0min；

步骤S5，再往步骤S4中的混合物中加入二硫苏糖醇溶液，100.0℃反应10.0min；

步骤S6，再往步骤S5中的混合物中加入碘乙酰胺溶液，室温避光反应30.0min；

步骤S7，再往步骤S6中的混合物中加入胰蛋白酶，37℃酶解2.5h，再加入甲酸水溶液终止酶解反应；

步骤S8，取步骤S7中的上清液进行LC-MS/MS分析。

3.根据权利要求2所述的基于液相色谱-质谱检测血清中特瑞普利单抗的方法，其特征在于，所述的步骤S1中配制系列浓度的校准品溶液是采用空白人血清配制系列浓度的特瑞普利单抗混合标准品溶液，浓度包括：2、5、25、50、100、200、300μg/mL。

4.根据权利要求2所述的基于液相色谱-质谱检测血清中特瑞普利单抗的方法，其特征在于，所述的步骤S1中配制质控品溶液是采用空白人血清配制低、中、高浓度的特瑞普利单抗混合质控品溶液，低、中、高浓度包括：6、80、250μg/mL。

5.根据权利要求2所述的基于液相色谱-质谱检测血清中特瑞普利单抗的方法，其特征在于，所述的步骤S1中配制内标工作液是采用0.1％甲酸水溶液配制内标工作液，内标工作液中含稳定同位素标记的通用单克隆抗体10μg/mL。