[发明专利]一种代谢工程改造大肠杆菌发酵制备β-丙氨酸的方法有效
| 申请号： | 202111076165.3 | 申请日： | 2021-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN113817659B | 公开（公告）日： | 2023-07-25 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;徐建;周丽;崔文璟;刘中美;程中一;韩来闯;郭军玲 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/64;C12N15/60;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/31;C12P13/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 代谢 工程 改造 大肠杆菌 发酵 制备 丙氨酸 方法 | ||
1.一种高效合成β-丙氨酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌过表达了天冬氨酸-α-脱羧酶、天冬氨酸氨裂解酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甘油脱氢酶和二羟丙酮激酶，并敲除了乳糖操纵子阻遏蛋白、乙醛羧酸循环抑制子、延胡索酸酶；
天冬氨酸-α-脱羧酶序列的NCBI Reference Sequence: NP_001096055.1；天冬氨酸氨裂解酶序列的NCBI Reference Sequence: NP_418562.4；
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶序列的NCBI Reference Sequence: NP_418391.1；甘油脱氢酶序列的NCBI Reference Sequence: NP_418380.4；
二羟丙酮激酶序列的NCBI Reference Sequence: NP_415718.6、NP_415717.1、NP_415716.4；
延胡索酸酶为延胡索酸酶A和延胡索酸酶C，延胡索酸酶A序列的NCBI ReferenceSequence: NP_416129.1，延胡索酸酶C序列的NCBI Reference Sequence:NP_416128.1；
以大肠杆菌B0016-082BB为宿主。
2.如权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，乳糖操纵子阻遏蛋白序列的NCBIReference Sequence: NP_414879.3；乙醛羧酸循环抑制子iclR序列的NCBI ReferenceSequence: NP_418442.2。
3.含有权利要求1或2所述重组大肠杆菌的微生物制剂。
4.一种生产β-丙氨酸的方法，其特征在于，以甘油为底物，利用权利要求1或2所述重组大肠杆菌或权利要求3所述的微生物制剂发酵生产。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将权利要求1或2所述重组大肠杆菌或权利要求3所述的微生物制剂加入反应体系，控制溶氧不低于45%，控制转速为200~900 rpm，通气量为2~10 L/min，温度为35~38℃，pH为6.5~7.5。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，流加碱液使反应体系的pH为6.5~7.5，从第一次溶氧反弹开始流加发酵补料培养基。
7.权利要求1或2所述重组大肠杆菌或权利要求3所述的微生物制剂或权利要求4~6任一所述生产β-丙氨酸的方法在制备β丙酮酸中的应用。
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