[发明专利]用于检测松材线虫的gRNA、试剂盒及载体系统

权利要求书

1.用于检测松材线虫的gRNA，其特征在于，包含a)向导序列为SEQ ID NO:1，其能够杂交至靶核苷酸序列，和b)与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段。

2.用于检测松材线虫的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的gRNA或可转录为所述gRNA的DNA；

还包含Cas核酸酶、信号报告分子、阳性对照和用于CRISPR检测体系的缓冲液中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述可转录为所述gRNA的DNA选自SEQID NO:10。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，Cas核酸酶选自Cas12核酸酶；

所述与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段为SEQ ID NO：2所示。

5.根据权利要求2~4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述信号报告分子为信号报告单链DNA分子，所述信号报告单链DNA分子为具有信号报告功能的DNA分子，当其中的DNA序列被降解时，可报告阳性信号并被检测到。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，包括试纸条，所述试纸条用以与所述信号报告单链DNA分子作用并显示所述信号报告单链DNA分子的信号结果。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述信号报告单链DNA分子的两端分别标记有第一标记物和第二标记物，如此，当所述信号报告单链DNA分子被CRISPR检测体系切割时，所述第一标记物与所述第二标记物分离；

所述试剂盒还包含试剂条，所述试纸条包括样品垫、反应膜和吸收垫，所述反应膜上设置有检测区和质检区；

其中：

所述检测区固定包被信号物质，所述信号物质上标记有针对所述第一标记物的第一抗标记物；

所述质检区固定包被有针对所述第二标记物的抗体；

所述第一标记物与所述第一抗标记物能够形成标记物-抗标记物复合物，且所述第一抗标记物与所述第二标记物的抗体不同。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述信号物质选自荧光团、比色标记、量子点、胶体金、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、LNA/PNA、非天然氨基酸及其类似物、非天然核酸及其类似物和纳米结构中的至少一种；

所述纳米结构包括无机纳米颗粒、NV-center、聚集/组装诱导发光分子、稀土离子配体分子以及多金属氧簇。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包含RNA聚合酶、扩增引物、DNA聚合酶、dNTPs、扩增缓冲液、样品预处理试剂和水中的至少一种；

其中所述扩增引物用于扩增含有所述gRNA靶向序列的核酸片段。

10.载体系统，其包含一种或多种载体，所述载体包含：第一调控元件和第二调控元件，所述第一调控元件可操作地连接至编码Cas核酸酶的核苷酸片段，所述第二调控元件可操作地连接至编码权利要求1所述gRNA的核苷酸片段。