[发明专利]文库构建引物组及其在高通量检测中的应用

权利要求书

1.一种文库构建引物组，其特征在于：包括若干用于目标区域扩增的扩增引物和用于文库构建的测序接头，所述扩增引物依次包括与目标区域序列匹配的靶向序列段、起到唯一识别作用的单分子标签段和与测序接头匹配的建库段，若干所述单分子标签段中包含长度不等的随机碱基。

2.根据权利要求1所述的文库构建引物组，其特征在于，所述扩增引物与所述测序接头序列的摩尔比为1:3-5。

3.根据权利要求1所述的文库构建引物组，其特征在于，所述单分子标签段中碱基的长度为4-20bp。

4.根据权利要求1所述的文库构建引物组，其特征在于，所述单分子标签段中还包含固定碱基，所述随机碱基N选自：核苷酸A、核苷酸G、核苷酸C或核苷酸T；所述固定碱基W选自：核苷酸A或核苷酸T。

5.根据权利要求4所述的文库构建引物组，其特征在于，所述单分子标签段由N_(1-9)WN_(1-9)W组成。

6.权利要求1-5任一项所述的文库构建引物组在制备高通量测序的文库构建检测试剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述高通量测序用于检测获得免疫组库序列信息。

8.一种用于免疫组库检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的文库构建引物组。

9.一种高通量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

核酸提取：取生物样本，提取其中核酸；

文库构建：取上述核酸，加入权利要求1-5任一项所述的文库构建引物组，进行PCR扩增，同时构建结构完整的文库；

上机测序：将上述文库进行高通量测序；

数据分析：利用生物信息学方法，对所得高通量测序数据进行分析，利用所述单分子标签段的信息进行纠错，获得测序结果。

10.根据权利要求9所述的高通量检测方法，其特征在于，所述检测方法用于检测免疫组库序列信息，所述数据分析步骤中，按照以下方法进行纠错：

低质量序列过滤：根据碱基的测序质量值，将低质量值的序列过滤掉；

确定单分子标签段位置：将测序所得reads数据与参考基因组进行序列比对，确定位于reads两端的扩增引物的对应位置，再以V区扩增引物向前单分子标签段长度的序列即为单分子标签段；

序列聚类：将两端单分子标签一致的序列，进行两两序列的比较计算汉明距离，再根据汉明距离对序列聚类，将汉明距离小于预定值的序列聚成一类；

碱基矫正：以聚类后每一类中含量最高的序列为中心序列，将该类中其它序列与中心序列不一致的碱基，参照所述中心序列进行矫正。