[发明专利]重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，该重组解脂耶氏酵母菌的基因组包括解脂耶氏酵母的基因组、环氧合酶OAC基因表达盒和聚酮合酶OLS基因表达盒。

2. 根据权利要求1所述的重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述解脂耶氏酵母为Yarrowia lipolytica Po1f -Δku70。

3.根据权利要求1或2所述的重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述环氧合酶OAC基因表达盒包括启动子、终止子、连接有启动子同源臂的OAC基因和连接有终止子同源臂的OAC基因；

所述聚酮合酶OLS基因表达盒包括启动子、终止子、连接有启动子同源臂的OLS基因和连接有终止子同源臂的OLS基因。

4.根据权利要求3所述的重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述环氧合酶OAC基因表达盒中启动子为来源于解脂耶氏酵母的P_TEFin启动子、P_TEF启动子或P_EXP启动子；

所述环氧合酶OAC基因表达盒中终止子为来源于解脂耶氏酵母的T_XPR2T终止子、T_CYC1t终止子或T_liplt终止子。

5.根据权利要求3所述的重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述聚酮合酶OLS基因表达盒中启动子为来源于解脂耶氏酵母的P_TEFin启动子、P_TEF启动子或P_GPD启动子；

所述聚酮合酶OLS基因表达盒中终止子为来源于解脂耶氏酵母的T_XPR2T终止子、T_CYC1t终止子或T_liplt终止子。

6. 根据权利要求1或2所述的重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述环氧合酶OAC基因表达盒中OAC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述聚酮合酶OLS基因表达盒中OLS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7. 权利要求1-6中任一项所述的重组解脂耶氏酵母菌的一种构建方法，其特征在于，该构建方法包括依次进行的以下步骤：

S1.重组质粒pUC57-SCP2-HUH-OAC的构建

构建环氧合酶OAC基因表达盒，在pUC57-SCP2-HUH骨架中插入来源于Yarrowialipolytica Polf-Δku70的染色体A中 SCP2位点上下游同源臂，

在所述SCP2位点上下游同源臂之间插入环氧合酶OAC基因表达盒，得重组质粒pUC57-SCP2-HUH-OAC；

S2.重组质粒pUC57-SCP2-HUH-OAC-OLS的构建

构建聚酮合酶OLS基因表达盒，取所述重组质粒pUC57-SCP2-HUH-OAC作骨架，在所述SCP2位点上下游同源臂之间插入聚酮合酶OLS基因表达盒，得重组质粒pUC57-SCP2-HUH-OAC-OLS；

S3.重组解脂耶氏酵母菌的构建

将所述重组质粒pUC57-SCP2-HUH-OAC-OLS转化入Yarrowia lipolytica Polf-Δku70，得所述重组解脂耶氏酵母菌。

8.根据权利要求7所述的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法，其特征在于，所述SCP2位点上下游同源臂的序列为SCP2位点上游1523bp至下游1524bp之间的序列。

9.权利要求1-6中任一项所述的重组解脂耶氏酵母菌在发酵生产橄榄醇酸中的应用。

10.根据权利要求9所述的重组解脂耶氏酵母菌的应用，其特征在于，所述发酵条件为28-30℃，200-240rpm；发酵培养基中葡萄糖浓度为40-80g/L。