[发明专利]重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法和应用，该重组解脂耶氏酵母菌是在解脂耶氏酵母基因组中插入密码子优化的环氧合酶OAC基因表达盒和聚酮合酶OLS基因表达盒后得到；本发明的重组解脂耶氏酵母菌用于高效合成橄榄醇酸，构建方法高效，操作简单，可绿色高效生产橄榄醇酸。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种重组解脂耶氏酵母菌，具体地说是一种重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法和应用。

背景技术

单芳族化合物橄榄醇酸(OA)除具有抗微生物，细胞毒性和光保护活性等功效外，还可在大麻素的生物合成过程中充当烷基间苯二酚，因其独特的药理特性，在药理化合物合成中有着广阔应用前景。

目前，OA及其衍生物的获取仍依赖于直接从植物中提取，这种植物提取法严重受植物生长周期和条件限制，地理和气候条件则显著影响所合成OA前体化合物的质量，提取周期极长。而现有的OA的化学合成法往往步骤繁琐，收率低。因此，寻找新的OA生产途径，尤其是绿色高效是今后OA工业化生产的必然发展趋势。

解脂耶氏酵母是经FDA认证的非常规安全产油酵母，具有胞内乙酰CoA/辅因子供应充足、细胞耐受性好及生成的油脂可包裹亲脂性萜类增强萜类存储能力等优势，同时，解脂耶氏酵母中的基因组操作工具相对成熟也建立了包括Gibson、Gateway、BioBricks及体内一步组装法的方法体系。通过基因工程利用解脂耶氏酵母生产OA相较于传统方法更绿色高效，但环氧合酶OAC基因及聚酮合酶OLS基因在解脂耶氏酵母中的异源高效表达效果不佳。

发明内容

本发明的目的，是要提供一种重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法，通过基因工程手段构建，以达到用于绿色高效生产橄榄醇酸的目的；

本发明的还有一个目的，是要提供上述重组解脂耶氏酵母菌在发酵生产橄榄醇酸中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种重组解脂耶氏酵母菌，该重组解脂耶氏酵母菌的基因组包括解脂耶氏酵母的基因组、环氧合酶OAC基因表达盒和聚酮合酶OLS基因表达盒。

其中，所述环氧合酶OAC基因表达盒和聚酮合酶OLS基因表达盒通过质粒形式导入所述解脂耶氏酵母，然后整合到解脂耶氏酵母基因组上。将环氧合酶OAC基因及聚酮合酶OLS基因导入解脂耶氏酵母基因组中，会产生环氧合酶OAC与聚酮合酶OLS，这两个酶反应生成橄榄醇酸OA。

作为一种限定，所述解脂耶氏酵母为Yarrowia lipolytica Po1f-Δku70。

作为另一种限定，所述环氧合酶OAC基因表达盒包括启动子、终止子、连接有启动子同源臂的OAC基因和连接有终止子同源臂的OAC基因；

所述聚酮合酶OLS基因表达盒包括启动子、终止子、连接有启动子同源臂的OLS基因和连接有终止子同源臂的OLS基因。

作为进一步限定，所述环氧合酶OAC基因表达盒中启动子为来源于解脂耶氏酵母的P_TEFin启动子、P_TEF启动子或P_EXP启动子；

所述环氧合酶OAC基因表达盒中终止子为来源于解脂耶氏酵母的T_XPR2T终止子、T_CYC1t终止子或T_liplt终止子。

作为进一步限定，所述聚酮合酶OLS基因表达盒中启动子为来源于解脂耶氏酵母的P_TEFin启动子、P_TEF启动子或P_GPD启动子；

所述聚酮合酶OLS基因表达盒中终止子为来源于解脂耶氏酵母的T_XPR2T终止子、T_CYC1t终止子或T_liplt终止子。