[发明专利]激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用

权利要求书

1.激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用，其特征在于，在体外环境下，通过添加Wnt/β-catenin信号通路的激活剂来激活Wnt/β-catenin信号通路从而促进水牛卵母细胞的成熟并提高之后的胚胎发育效率；

所述激活Wnt/β-catenin信号通路的激活剂为氯化锂。

2.一种提高水牛体外胚胎的生产效率的方法，其特征在于，所述方法为：

（1）获取水牛卵丘-卵母细胞复合体；

（2）将步骤（1）获取的复合体放入成熟培养液中进行体外成熟培养；所述成熟培养液的组分由如下成分组成：体积百分比为10％的胎牛血清、5ng/mL的卵泡刺激素、10ng/mL的黄体生成素、0.2mM的丙酮酸钠、1µg/mL的雌二醇、50 µM半胱氨酸、25ng/mL的表皮生长因子和10µM的氯化锂；余量为TCMl99培养液；

（3）取水牛卵丘-卵母细胞复合体转入覆盖石蜡油的成熟卵培养液微滴内，培养22-24h；

（4）将步骤（3）培养成熟的水牛卵丘-卵母细胞复合体转入体外受精（IVF）液微滴中，与水牛精子共同孵育22-24h，完成体外受精；

（5）将步骤（4）受精后的水牛卵丘-卵母细胞复合体吹打去除卵丘细胞后，用胚胎培养液清洗3次，转入含卵丘细胞单层的胚胎培养液微滴进行胚胎培养，即得水牛体外生产胚胎。

3.根据权利要求2所述的一种提高水牛体外胚胎的生产效率的方法，其特征在于，所述步骤（5）的卵丘细胞单层制备方法为：将屠宰场获得的水牛卵丘-卵母细胞复合体成熟培养24h后，取2-3个卵丘细胞扩展良好的水牛卵丘-卵母细胞复合体，转入覆盖石蜡油的40 µL胚胎培养液微滴内，用100 µL枪头吹打使卵丘细胞均匀分布于微滴内，培养2-4天，使卵丘细胞在微滴内生长到100%汇集，得到胚胎培养用的卵丘细胞单层。