[发明专利]一种仿刺参精酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性研究方法

说明书

本发明提供了一种用响应面法优化仿刺参精酶解的加工工艺，响应面法优化仿刺参精酶解加工工艺的最佳水解条件为温度70℃，加酶量4.4％，水解时间4h。本发明以处于性腺成熟期的仿刺参精为原料，使用响应面法对仿刺参精酶解工艺进行优化，并分析提取的仿刺参精酶解液的抗氧化活性。

技术领域

本发明涉及仿刺参副产物再利用技术领域，具体涉及一种仿刺参精酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性研究方法。

背景技术

仿刺参是一种主要分布于中国、俄罗斯、韩国和日本沿海的海参，是重要的海洋食品和药物资源。仿刺参中生物活性物质的提取和利用一直是备受关注的研究领域，主要集中在仿刺参的体壁活性物质研究上。性腺和肠道组织属于仿刺参的内脏，作为仿刺参加工过程中的副产物常常被丢弃，没有得到有效利用，从而导致资源浪费和环境污染。

仿刺参性腺包括卵子和精子，在收集过程中两者极易混合在一起，研究表明，仿刺参性腺不仅富含多糖，而且蛋白质、脂肪酸和其它活性成分含量丰富，其中的蛋白质更是优质多肽的来源。目前，对于仿刺参的研究主要集中在体壁的组成成分及功能活性，关于仿刺参性腺的研究也很少，而关于仿刺参精的活性研究暂未见报道。

相关研究表明，不同分子量的多肽通常会表现出显著差异的抗氧化活性。O₂^-·是所有氧自由基中的第一个自由基，可以经过一系列反应生成其它氧自由基，具有很强的氧化能力；·OH是化学性质最活泼的活性氧物种，几乎与生物体内所有物质反应，在活性氧中，它的危害最大。因此，我们测试了收集到的三种多肽对O₂^-·和·OH的清除能力，以此考察它们的抗氧化活性。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种仿刺参精酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性研究方法。

本发明解决技术问题采用如下技术方案：

本发明提供了一种用响应面法优化仿刺参精酶解的加工工艺，响应面法优化仿刺参精酶解加工工艺的最佳水解条件为温度70℃，加酶量4.4％，水解时间4h。

优选地，响应面法优化仿刺参精酶解具体加工工艺的操作步骤为：

步骤一，仿刺参精酶解：仿刺参精清洗干净，沥干水分后经由胶体磨研磨匀浆，准确称取仿刺参精匀浆液10g，加入0.5-0.7g木瓜蛋白酶，混合均匀，在恒温水浴锅中进行酶解，酶解完成后立即取出，将酶解液置于100℃水浴锅中灭酶10min；

步骤二，水解度的测定：根据三氯乙酸(TCA)方法测定水解度，取1mL酶解液加入1mL的10g/100mL的TCA，混合振荡，静止10min后，10000r/min离心10min，取上清液以双缩脲法测可溶性蛋白含量，用凯氏定氮法测总蛋白含量，按照下式计算水解度(DH)：

DH＝(ρ₁-ρ₂₎/(ρ₀-ρ₂)×100 (1)

步骤三，单因素研究：为了考察酶解温度、加酶量和酶解时间三个因素对水解度的影响，首先进行单因素实验，制定酶解的基本条件为：酶解温度65℃，加酶量([E/S])3％，时间5h；固定其中两个条件，改变另外一个条件，分别考察不同的影响因素；

步骤四，响应面法优化水解条件：在单因素实验的基础上，以水解度为衡量指标，选取酶解温度、加酶量和时间三个因素，设计了三因素三水平的响应面实验，选用木瓜蛋白酶，进行酶解条件的优化，根据单因素实验结果，采用Box-Behnken设计实验，来分析三个因素对水解度的影响，试验次数为17次，其中析因部分试验次数12次，中心点重复试验次数5次。