[发明专利]一种黄山松的组培快繁方法

权利要求书

1.一种黄山松的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）外植体的预处理：

将黄山松球果置于自然光照下晾晒，以获取黄山松种子；接着，去除黄山松种子的外种皮；

（2）外植体的消毒：

将去除外种皮的黄山松种子，采用75%酒精与1%次氯酸钠溶液进行组合消毒；随后，在无菌滤纸上吸干水分，并挑出种子胚，即得接种所需的无菌外植体；

（3）愈伤组织诱导：

无菌条件下，将步骤（2）获得的无菌外植体接种于愈伤组织诱导培养基上，进行愈伤组织的诱导；诱导培养至12~16 d时，外植体开始愈伤化；其中，愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，pH 5.8；

（4）不定芽的诱导与伸长：

挑选愈伤组织，将其转接至不定芽诱导培养基，进行不定芽的诱导；诱导培养至25~35d时，愈伤组织开始长出不定芽；其中，不定芽诱导培养基的配方为：DCR+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1 mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA，pH 5.8；

待长出不定芽，将诱导的不定芽转接至伸长培养基，进行不定芽的伸长培养；其中，伸长培养基的配方为：DCR+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+0.1mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA，pH 5.8；

（5）生根培养：

选择高度为1~2 cm的黄山松不定芽，并在去除其芽基部的针叶后，将其转接至生根培养基中进行直接生根培养；生根培养35~45d时，开始生根；其中，生根培养基的配方为：1/2DCR+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+2mg/L IBA+0.05mg/L NAA，pH 5.8。

2.根据权利要求1所述的黄山松的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（1）中，黄山松球果采自安徽黄山风景区。

3.根据权利要求1所述的黄山松的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（2）中，采用75%酒精与1%次氯酸钠溶液进行组合消毒的具体过程为：将去除种皮的黄山松种子取出备用；接着，在超净工作台中，先用无菌水清洗种子3~5次，再利用75%酒精漂洗60 s，利用1%次氯酸钠溶液浸泡10 min，最后再用无菌水冲洗 3~5 次。

4.根据权利要求1所述的黄山松的组培快繁方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导、不定芽的诱导与伸长，以及，生根培养的过程中，培养条件均为：培养温度25±2℃，相对湿度70%~80%，光照时间14~16h/d，光照强度2000~2500Lx。

5.根据权利要求1~4任一所述的黄山松的组培快繁方法，其特征在于，还包括步骤（6）的炼苗移栽步骤；所述炼苗移栽过程如下：

待黄山松生根苗长出发达根系后，打开组培苗瓶盖，炼苗3~5天，期间保持培养基中水分充足；随后，将组培瓶中的培养基用玻璃棒捣碎，并将组培苗从组培瓶中取出；接着，用自来水将其根部培养基冲洗干净，并移栽至花盆中；最后，将移栽的黄山松苗置于培养室中进行培养。