[发明专利]一种黄山松的组培快繁方法

说明书

本发明提供了一种黄山松的组培快繁方法，方法如下：获取黄山松种子；并去除其外种皮；采用75％酒精与1％次氯酸钠溶液进行组合消毒；随后，吸干水分，挑出种子胚；将外植体接种于愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导；挑选愈伤组织转接至不定芽诱导培养基进行不定芽诱导；将不定芽转接至伸长培养基进行不定芽伸长培养；选择高度为1～2cm的黄山松不定芽，并在去除其芽基部的针叶后，将其转接至生根培养基中进行直接生根培养。本发明的优点在于：首次以黄山松种子的种胚为实验材料，建立了黄山松组培快繁技术；且操作简单、培育成本低、繁殖效率高、受自然环境影响小，有很好的市场及产业化应用前景。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种黄山松的组培快繁方法。

背景技术

黄山松是中国特有针叶树种，是我国东部亚热带高海拔地区山地绿化、造林和生态恢复的重要树种。黄山松具有较强的生态演替功能、极强的适应性、较高的生态环保功能以及独特的自然景观效果。松树是松材线虫的危害寄主，而松材线虫病传入我国以来，截止2020年12月31日，已蔓延至全国18个省(自治区、直辖市)726个县级行政区，严重威胁我国生态安全、生物安全和经济发展。黄山松是松材线虫病的寄主之一，并于2004年在安庆大龙山林场近700m高的海拔林地中首次发现了自然状态下松材线虫侵染黄山松，并造成数株黄山松枯死，这对黄山景区内黄山松种质资源造成巨大威胁。然而，目前关于黄山松种质资源保存与组培快繁体系的研究还未见报道。

植物组织培养是植物种质资源保存的重要方式。植物组织培养具有生长周期短、繁殖率高、管理方便等诸多优点，有利于工厂化生产和自动化控制。利用植物组织培养技术，不仅可以在短时间内快速繁殖珍稀濒危植物，使珍稀物种得以保存。同时，该技术可以快速繁殖名优特新品种，获取具有母本优良性状的植株。

据此，若能以黄山松种子的种胚为外植体开展黄山松组培快繁技术，将对黄山松种质资源保存、遗传改良、新品种培育和优质种苗繁殖等方面具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种黄山松的组培快繁方法，其操作简单、培育成本低、繁殖效率高，且受自然环境影响小，有很好的市场及产业化应用前景。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种黄山松的组培快繁方法，包括如下步骤：

(1)外植体的预处理：

将黄山松球果置于自然光照下晾晒，以获取黄山松种子；接着，去除黄山松种子的外种皮；

(2)外植体的消毒：

将去除外种皮的黄山松种子，采用75％酒精与1％次氯酸钠溶液进行组合消毒；随后，在无菌滤纸上吸干水分，并挑出种子胚，即得接种所需的无菌外植体；

(3)愈伤组织诱导：

无菌条件下，将步骤(2)获得的无菌外植体接种于愈伤组织诱导培养基上，进行愈伤组织的诱导；其中，愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+30g/L蔗糖 +7g/L琼脂粉+1mg/L6-BA+0.2mg/L NAA，pH 5.8；

(4)不定芽的诱导与伸长：

挑选愈伤组织，将其转接至不定芽诱导培养基，进行不定芽的诱导；其中，不定芽诱导培养基的配方为：DCR+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA，pH 5.8；

待长出不定芽，将诱导的不定芽转接至伸长培养基，进行不定芽的伸长培养；其中，伸长培养基的配方为：DCR+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+0.1mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA，pH5.8；

(5)生根培养：