[发明专利]一种机体保护多肽粗品的纯化方法

权利要求书

1.一种机体保护多肽粗品的纯化方法，包括以下步骤：

将机体保护多肽粗品溶解，得到机体保护多肽粗品溶液；

对所述机体保护多肽粗品溶液进行高效液相色谱分离纯化，得到机体保护多肽纯品；

所述高效液相色谱分离纯化包括依次进行第一高效液相色谱纯化和第二高效液相色谱纯化；

所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：

第一色谱柱：C₁₈柱；

第一流动A相：磷酸二氢钠水溶液，所述磷酸二氢钠水溶液的浓度为3～30g/L；

第一流动B相：乙腈；

第一流速：1～1000mL/min；

第一梯度洗脱程序为：

0～60min：n₁vol％→m₁vol％第一流动B相；n₁为5～10，m₁为30～60；

第一检测波长：210～260nm；

所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：

第二流动A相：乙酸水溶液，所述乙酸水溶液中乙酸和水的体积比为(0.1～5)：100；

第二流动B相：乙腈；

第二流速：1～1000mL/min；

第二梯度洗脱程序为：

0～60min：n₂vol％→m₂vol％第二流动B相；n₂为5～10，m₂为30～60；

第二检测波长：210～260nm。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述机体保护多肽粗品溶解的溶剂为乙酸水溶液；所述乙酸水溶液中乙酸的体积百分含量为5％～15％。

3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述机体保护多肽粗品溶液中机体保护肽的浓度为10～100mg/mL。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化得到第一纯化机体保护多肽；将所述第一纯化机体保护多肽进行第二高效液相色谱纯化。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一检测波长和第二检测波长独立地为220～250nm。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一色谱柱和第二色谱柱的有效长度独立地≥150mm；直径独立地为10～200mm；所述第一色谱柱和第二色谱柱的填充物的粒径独立地为10～30μm。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：5vol％→55vol％第一流动B相；所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％→60vol％第二流动B相。

8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％→30vol％第一流动B相；所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％→50vol％第二流动B相。

9.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：5vol％→55vol％第一流动B相；所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％→40vol％第二流动B相。

10.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第二高效液相色谱纯化后，还包括将所得第二高效液相色谱纯化馏分进行冷冻干燥，得到所述机体保护多肽纯品。