[发明专利]一种机体保护多肽粗品的纯化方法

说明书

本发明属于生物分子分离纯化技术领域，本发明提供了一种机体保护多肽粗品的纯化方法。本发明的第一高效液相色谱纯化能够除去粗品中含有的残留溶剂(包括三氟乙酸、乙二硫醇、甲基叔丁基醚)、残留保护基和大部分杂质；所述第二高效液相色谱纯化能够除去第一高效液相色谱纯化未除去的杂质以及磷酸根离子以及钠离子。本发明提供的纯化方法得到的是机体保护多肽的乙酸盐，利于人体吸收；且所得机体保护多肽纯度高、收率高。实施例的数据表明：机体保护多肽纯品的纯度为99.58％以上，单杂的含量＜0.1％。

技术领域

本发明涉及生物分子分离纯化技术领域，尤其涉及一种机体保护多肽粗品的纯化方法。

背景技术

机体保护多肽(BPC-157)为胃液肽的片段，含有15个氨基酸，分子量为1419.5，序列为Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys-Pro-Ala-Asp-Asp-Ala-Gly-Leu-Val。BPC-157能够促进肌肉和韧带的再生，促进创面愈合，提高肌腱的硬度与弹性；对于健美运动员增肌具有重要作用。研究表明，BPC-157在人体器官中有多种保护作用，如胰腺、肝损伤、内皮、心脏损伤和关节，使其成为一种多功能肽，能够给人类带来巨大的益处。公开号为CN 102229649A的中国专利公开了将合成的粗品使用0.1％三氟乙酸-水、0.1％三氟乙酸-乙腈体系进行HPLC纯化洗脱冻干，得到BPC-157样品。所得BPC-157样品的纯度低，单杂含量高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供了一种机体保护多肽粗品的纯化方法。本发明提供的纯化方法中得到的是机体保护多肽纯度高，单杂含量低。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种机体保护多肽粗品的纯化方法，包括以下步骤：

将机体保护多肽粗品溶解，得到机体保护多肽粗品溶液；

对所述机体保护多肽粗品溶液进行高效液相色谱分离纯化，得到机体保护多肽纯品；

所述高效液相色谱分离纯化包括依次进行第一高效液相色谱纯化和第二高效液相色谱纯化；

所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：

第一色谱柱：C₁₈柱；

第一流动A相：磷酸二氢钠水溶液，所述磷酸二氢钠水溶液的浓度为3～30g/L；

第一流动B相：乙腈；

第一流速：1～1000mL/min；

第一梯度洗脱程序为：

0～60min：n₁vol％→m₁vol％第一流动B相；n₁为5～10，m₁为30～60；

第一检测波长：210～260nm；

所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：

第二流动A相：乙酸水溶液，所述乙酸水溶液中乙酸和水的体积比为(0.1～5)：100；

第二流动B相：乙腈；

第二流速：1～1000mL/min；

第二梯度洗脱程序为：

0～60min：n₂vol％→m₂vol％第二流动B相；n₂为5～10，m₂为30～60；

第二检测波长：210～260nm。